[发明专利]一种检测急性髓系白血病易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，尤其涉及一种检测急性髓系白血病易感性的试剂盒，通过检测丝裂原活化蛋白激酶激酶4 (CD44)的单核苷酸多态性（SNP）位点来预测急性髓系白血病的易感性。

背景技术

血液恶性肿瘤全世界发病例数约为40万，占各种恶性肿瘤的第六位。中国年发新增病例为25万左右，占我国恶性肿瘤的第八位。癌症的发生是一个多因素，多阶段，多基因变异的过程。作为细胞表面的功能的关键分子，CD44参与了肿瘤发生发展的各个重要过程。大量的研究表明，肿瘤免疫调控相关基因的单核苷酸多态可以通过改变这些基因的表达水平的方式，影响这些基因在肿瘤发生、发展中的作用。

SNP（Single nucleotide polymorphism），即单核苷酸多态性，是人类基因组作图的第三代遗传标记，主要是指一类基于单碱基变异引起的DNA序列多态性，包括单碱基转换、颠换，以及单碱基的插入/缺失等。它是基因组最广泛存在的一类多态性标记，已成为研究基因组多态性和识别、定位疾病相关的一种工具。1996年成功研制了SNP检测的实时荧光定量PCR技术，实现了PCR从定性到定量的飞跃，还实现了判断结果的自动性。可利用荧光定量PCR技术研发检测疾病易感性的试剂盒。

CD44 是细胞表面最重要的透明质酸(HA)受体，通过与HA相互作用促进细胞迁移、诱导信号转导，在多种恶性肿瘤组织都有表达，且与肿瘤生长发展转移相关，是肿瘤负荷和疾病活动度的可靠指标。有研究表明，CD44表达异常可早于Ras、p53等抑癌基因的异常表达，提示其变异可能与Ras基因激活有关，可能是参与肿瘤形成的一个因素。近年来，CD44与血液肿瘤发生、发展、转移、预后、治疗等方面的关系逐渐引起关注。研究发现，CD44表达于所有的AML亚型，与特异性单抗或配体HA结合后可作为信号因子活化细胞功能，这些特性都使其成为AML诱导分化的一个可能靶点（参见：Jia L, Guo J. Cellular & Molecular. Immunology. 2006 3:359-65）。 Gadhoum等发现直接针对CD44细胞表面抗原的特异性单克隆抗体能触发AML1至AML5型白血病细胞的终末分化，抑制其增殖，有些可以引起凋亡（参见：Gadhoum Z, Delaunay J, Maquarre E, Durand L, Lancereaux V, Qi J, Robert-Lezenes J, Chomienne C, Smadja-Joffe F. Leuk Lymphoma. 2004 45:1501-10.）。Charrad等证实CD44与其单克隆抗体结合后能诱导THP-1、 HL-60和NB4细胞终末分化、强烈抑制其增殖、诱导凋亡（参见：Charrad RS, Gadhoum Z, Qi J, Glachant A, Allouche M, Jasmin C, Chomienne C, Smadja-Joffe F. Blood. 2002 99:290-9.）。Johnsson等以基因芯片技术分析了几种对细胞生长抑制剂耐药的细胞系的基因表达全貌，发现在这些细胞系中CD44表达均有改变（参见：Johnsson A, Vallon-Christensson J, Strand C, Litman T, Eriksen J. Anticancer Res. 2005 25:2661-8.）。Artus等发现CD44与其单抗结合能触发一种新的Caspase非依赖性通路，通过释放钙蛋白酶依赖性凋亡诱导因子发挥作用（参见：Artus C, Maquarre E, Moubarak RS, Delettre C, Jasmin C, Susin SA, Robert-Lézénès J. . Oncogene. 2006 25:5741-51.）。Zada等研究发现，CD44的单抗A3D8通过特异性破坏细胞周期、诱导G0/Gl期停滞发挥作用；同时可引起p21表达增加、pRb磷酸化减弱、CDK2/CDK4激酶活性降低。AML原代细胞、HL-60、U937细胞经A3D8作用后，mRNA和蛋白水平的c-jun表达下调，JNK蛋白表达降低、磷酸化的c-jun减少，瞬时转染显示c-jun启动子活性被A3D8抑制；HL-60细胞中c-jun异位过表达能诱导增殖、阻止A3D8的增殖抑制作用，说明CD44与其抗体结合可诱导髓性白血病细胞的细胞周期停滞和增殖停滞，在此过程中，细胞周期和增殖的重要调节器c-jun有重要作用（参见：Zada AA, Singh SM, Reddy VA, Els??sser A, Meisel A, Haferlach T, Tenen DG, Hiddemann W, Behre G. Oncogene. 2003 22:2296-308.）。