[发明专利]黄热病毒荧光定量PCR检测新方法及黄热病毒检测PCR体系

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及黄热病毒的快速定性和定量检测方法及黄热病毒检测PCR体系，提供一对特异性引物和探针。 

背景技术

黄热病是一种急剧性病毒病，是出血症的重要起因。每年全世界至少有20万黄热病病例，造成3万人死亡。由于黄热病的死亡率高及传染性强，已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一。一些国家法律规定，到有地方病的地区的旅行者必须接种疫苗。只有少数几种疾病有此“殊荣”，黄热病是其一。黄热病毒属虫媒病毒B组，为RNA病毒、呈球形、约20-60纳米。目前用于黄热病毒的检测方法已经有微孔杂交、芯片检测、套式PCR等，这些方法各有千秋，但如果能用荧光定量PCR核酸检测方法进行检测，也不失为一种更加直观、准确、快速的，适合早期诊断的检测手段。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄热病毒荧光定量PCR检测新方法及黄热病毒检测PCR体系，该方法能够快速定性和定量检测黄热病毒，包括一对特异性更高、灵敏度高、重复性好的引物和探针。 

为实现上述目的，本发明黄热病毒荧光定量PCR检测新方法，该方法中设计采用的引物探针为： 

  Name   Sequence   Position   Tm℃   Modification   FP   ATGTCTGGTCGTAAAGCTCAGG   119-140   58.7    RP   AGGTCCAGGTCTGTTTCCAAT   218-238   57.6    Probe   TCAATATGGTACGACGAGGAGTTCGC   156-181   67.7   FAM/BHQ-1

进一步，所述的黄热病毒荧光定量PCR检测新方法，具体为： 

1)设计引物探针； 

2)根据仪器选择荧光素； 

3)合成引物和探针； 

4)制备阳性质粒标准品； 

5)运行PCR； 

6)数据分析； 

7)提取病毒RNA进行体系验证。 

进一步，所述步骤2)中荧光素的供选择的荧光发射基团有6-FAM、TET、HEX、JOE、CY3、CY5、TAMRA、Texas Red，荧光淬灭基团有BHQ-1、BHQ-2、Lowa Black^TMRQ、Lowa Black^TMFQ、Dabcyl。