[发明专利]登革热病毒荧光定量PCR检测新方法及登革热病毒检测PCR体系

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及登革热病毒的快速定性和定量检测方法，提供一对特异性引物和探针。

背景技术

登革热(Dengue fever，DF)是由1～4型登革病毒引起、经伊蚊传播的急性传染病，按照《中华人民共和国传染病防治法》的规定为乙类传染病。亚洲、大洋洲、美洲和非洲均有本病发生，是热带、亚热带地区的一个非常严重的公共卫生问题。登革出血热和登革休克综合征的病死率较高，不仅严重影响人民的身体健康，而且严重影响当地经济、贸易和旅游事业的发展。目前登革热的监测方法有ELISA血清学检测、RT-PCR核酸检测、病毒分离序列测定、免疫荧光抗原检测法等。但荧光定量PCR核酸检测的方法不失为一种更直观、准确、快速的适合早期诊断的检测标准。

发明内容

本发明的目的在于提供一种登革热病毒荧光定量PCR检测新方法及登革病毒检测PCR体系，其能够快速定性和定量检测登革热病毒，包括一对特异性更高、灵敏度高、重复性好的引物和探针。

为实现上述目的，本发明登革热病毒荧光定量PCR检测新方法中设计采用的引物探针为：

  Name   Sequence   Position   Tm℃   Modification   FP   GCTGGAAGGACTAGAGGTTAGAG  10627-10649   56.6    RP   GATTCAACAGCACCATTCCAT  10748-10768   57.2    Probe   AAACAGCATATTGACGCTGGGAAAGA  10670-10695   67.4   Texas Red/BHQ-2

进一步，登革热病毒荧光定量PCR检测新方法，具体为：

1)设计引物探针；

2)根据仪器选择荧光素；

3)合成引物和探针；

4)制备阳性质粒标准品；

5)运行PCR；

6)数据分析；

7)提取病毒RNA进行体系验证。

进一步，所述步骤2)中荧光素的供选择的荧光发射基团有6-FAM、TET、HEX、JOE、CY3、CY5、TAMRA、Texas Red，荧光淬灭基团有BHQ-1、BHQ-2、Lowa Black^TMRQ、Lowa Black^TMFQ、Dabcyl。