[发明专利]一种产谷氨酰胺转胺酶活化蛋白酶抑制剂的基因工程菌及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种产谷氨酰胺转胺酶（TGase）活化蛋白酶抑制剂的基因工程菌及其构建方法，属于遗传工程领域。

背景技术

蛋白质一般是由疏水性氨基酸基和亲水性氨基酸基构成，由于丙氨基酸基的平衡作用，蛋白质显示表面活性。由于极性或非极性氨基酸在每一种蛋白质肽链中分布的不规则性或特异性，以及蛋白质空间结构和空间结构作用力如二硫键等的影响。因此，绝大多数天然蛋白质因非极性基团被包裹在致密稳固的蛋白质分子内部而无法表现出其表面活性功能。但是在一些蛋白质多肽链的某些区段会出现一端是极性氨基酸残基聚集区、而另一端则是非极性氨基酸残基聚集区的结构，如酪蛋白α_s1-Casein N末端肽链23个氨基酸残基序列具有非常突出的表面活性性能。

TGase活化蛋白酶抑制剂（TGase-activating protease inhibitor，简称TAPI）是本实验室发现的一种新型小分子蛋白酶抑制剂，它通过对丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶这两类蛋白酶的抑制来调控TGase活化。由张东旭（DONGXU ZHANG etc.,2008, Surfactant Protein of the StreptomycesSubtilisin Inhibitor Family Inhibits Transglutaminase Activation in Streptomyceshygroscopicus, J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 3403–3408 3403）从吸水链霉菌中分离纯化得到，经鉴定TAPI属于链霉菌的SSI蛋白家族，分子量大约12KDa。张东旭还对TAPI（P₁₂）进行了相关性质的研究，发现TAPI能够被疏水柱很牢固的吸附，只有用水才能洗脱下来，这一结果说明TAPI具有很强的疏水性。而同时TAPI又具有水溶性。进一步的研究中，还发现TAPI能够改变水溶液的界面性质，就是一种表面活性蛋白。

随着人们越来越关注各类产品的安全性、温和性和对“绿色性”等要求的提高，研究并开发多功能、高质量和“绿色”新型表面活性剂已经成为表面活性剂行业的主要发展方向。其中，高表面活性和生物降解性、多功能性及生物兼容性优良的“绿色”表面活性剂已成为新型表面活性剂技术进步的主要标志。

由于蛋白质具有生物降解性好、无毒、无污染的优点，非常符合当前表面活性剂的发展要求。因此，蛋白质的表面性能对于研究和开发新一代表面活性剂是非常有意义的。因此被广泛应用于食品、医药和化妆品等行业，但仍以个人生活用品等传统应用领域为主。用于家用洗涤剂中，能表现出良好的稳泡性和洗涤能力；在香波、沐浴露和洗手液中能表现出良好的洗涤力、发泡力，产生丰富且稳定的泡沫，当皮脂类油状物质存在时也不消泡，是温和型绿色表面活性剂开发的主要方向及研究热点，具有很大的发展潜力。可以单独使用，也可与其他洗涤剂并用。为防止腐败，必须加入防腐剂，此外由于蛋白质类表面活性剂在高温的油-水界面上可形成稳定的分子膜，又是石油化工厂的有效灭火剂。

目前国际上较有影响的蛋白质表面活性剂(Protein·based surfaeants，PBS)产品主要在美国、德国、日本等国家，国内关于PBS的研究却很少，主要依赖进口，因此蛋白质表面活性剂产品的研究，尤其是新型蛋白质类表面活性剂的开发显的极为迫切。

发明内容

本发明要解决的技术问题是一种产谷氨酰胺转胺酶（TGase）活化蛋白酶抑制剂的基因工程菌。

所述基因工程菌含有TAPI基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述TAPI基因位于pET22b(+)。

本发明要解决的另一个技术问题是提供一种TGase活化蛋白酶抑制剂基因工程菌的构建方法。

为解决上述技术问题，所采用的技术方案包括如下具体步骤：