[发明专利]构建应用于高质量噬菌体抗体库的表达载体

说明书

技术领域

本发明涉及一种构建应用于高质量噬菌体抗体库的表达载体。

背景技术

噬菌体抗体库技术的发展和应用为抗体技术领域带来了巨大的变化，已被广泛应用于生物学、医学等各个研究领域，通过基因工程和噬菌体展示技术的结合，能得到人源化的针对几乎所有抗原表位的抗体，这极大地推动了各种性能优良抗体及多功能抗体融合蛋白的开发和应用。噬菌体抗体库模拟了天然抗体库，使得人们可以不经过复杂的免疫过程，而是直接利用抗原就可以从抗体库中筛选出特异性抗体成为可能。它既解决了人源性单抗的来源困难、人体杂交瘤系统的低效及鼠单抗的动物源性等难题，也使得单克隆抗体的制备变得简单易行，稳定有效，使人单克隆抗体的制备有了突破。但是，此技术目前还有许多问题尚待解决，如在保证抗体库的多样性和呈现效率的同时，如何提高有效库容量、如何在构建抗体库时提高抗体基因连接效率等问题上，还有待进一步解决。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种载体。

本发明提供的载体，按照如下方法制备：

1)将SacB的编码基因1插入到pDF的多克隆位点间，得到中间载体PSBX；

2)将步骤1)得到的中间载体PSBX的BssHII酶切位点改为BglII酶切位点，得到中间载体PSGX；

3)将SacB的编码基因2插入到步骤2)得到的中间载体PSGX的Nhe I和NcoI酶切位点间，得到载体pDF-D-SacB；

所述SacB的编码基因1为序列表的序列1自5’末端第30-1908位核苷酸；

所述SacB的编码基因2为序列表中的序列2自5’末端第7-1857位核苷酸。

步骤1)中，所述将SacB的编码基因1插入到pDF的多克隆位点为将SacB的编码基因1插入到pDF的BssHII和Xba I酶切位点间。

本发明的另一个目的是提供一种载体。

本发明提供的载体按照如下方法制备：

1)以puc19-SacB为模板，用引物对1进行PCR扩增，得到PCR产物1，将PCR产物1插入到pDF的BssHII和Xba I酶切位点间，得到中间载体PSBX；所述PCR产物1即为SacB的编码基因1，所述SacB的编码基因1为序列表的序列1自5’末端第30-1908位核苷酸；

所述引物对1中的一条引物的核苷酸序列为序列表中的序列5，所述引物对1中的另一条引物的核苷酸序列为序列表中的序列6；

2)将步骤1)得到的中间载体PSBX上的BssHII酶切位点改变为BglII酶切位点，得到中间载体PSGX；

3)以pUC19-SacB为模板，用引物对2进行PCR扩增，得到PCR产物2，将得到的PCR产物2插入到步骤2)得到的中间载体PSGX的Nhe I和Nco I位点间，得到重组载体pDF-D-SacB；所述PCR产物2即为SacB的编码基因2，所述SacB的编码基因2为序列表中的序列2自5’末端第7-1857位核苷酸；

所述引物对2中的一条引物的核苷酸序列为序列表中的序列7，所述引物对2中的另一条引物的核苷酸序列为序列表中的序列8。

上述将BssHII酶切位点改为BglII酶切位点按照如下方法进行：

A：将中间载体PSBX用BssHII酶切后，再加入碱性磷酸酶去磷酸化，得到去磷酸化的PSBX线性片段；B：将含有BglII的引物对在98℃-20℃进行退火，得到退火的引物对，再向退火的引物对进行磷酸化处理，得到磷酸化的退火引物对；

C：将磷酸化的退火引物对和去磷酸化的PSBX线性片段连接，得到中间载体PSGX；

所述含有BglII的引物对中的一条引物为序列表中的序列3，另一条引物为序列表中的序列4。

所述将含有BglII的引物对在98℃-20℃进行退火，具体为将含有BglII的引物对在98℃、90℃、80℃、70℃、60℃、50℃、40℃、30℃和20℃进行退火。

含有所述的载体的转基因细胞系或重组菌或重组病毒也是本发明保护的范围。

所述的载体或所述转基因细胞系或重组菌或重组病毒在制备噬菌体抗体库中的应用也是本发明保护的范围。

所述应用中，所述抗体为抗乙肝表面抗原抗体。