[发明专利]酵母双杂交质粒的构建方法无效
| 申请号： | 201010553950.9 | 申请日： | 2010-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN102061307A | 公开（公告）日： | 2011-05-18 |
| 发明（设计）人： | 华修国;沈权;崔立;张文 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母 双杂交 质粒 构建 方法 | ||
1.一种酵母双杂交质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，以戊型肝炎病毒基因组RNA为模板设计引物并采用RT-nPCR方法扩增；
步骤二，将步骤一所得扩增产物进行双酶切，将双酶切得到的如Seq ID No.1所示的DNA片段插入pSOS质粒得到重组载体；
步骤三，制备酵母感受态细胞，在酵母感受态细胞中加入步骤二所得重组载体以及肝cDNA文库质粒DNA，经培养后筛选阳性酵母克隆；
步骤四，提取阳性酵母克隆中的质粒并转入大肠杆菌感受态细胞，筛选文库质粒后得到酵母双杂交质粒。
2.根据权利要求1所述的酵母双杂交质粒的构建方法，其特征是，所述的引物为：
上游引物：5’-CAGGATCCCCGACAGAATTGATTTCGTC-3’；
下游引物：5’-CAGTCGACAGGGGCGAGGACACCAACG-3’。
3.根据权利要求1所述的酵母双杂交质粒的构建方法，其特征是，所述的双酶切是指：BamH I和Sal I。
4.根据权利要求1所述的酵母双杂交质粒的构建方法，其特征是，所述的肝cDNA文库质粒DNA是指：肝cDNA文库购自Stratagene公司，扩增后提取质粒DNA。
5.根据权利要求1所述的酵母双杂交质粒的构建方法，其特征是，所述的培养是指：在22-25℃的室温下培养5天。
6.根据权利要求1所述的酵母双杂交质粒的构建方法，其特征是，所述的筛选是指：利用温度和营养缺陷的方法将阳性克隆选出。
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