[发明专利]一种猪圆环病毒2型的乳胶凝集检测方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于家畜类免疫学技术领域，涉及免疫学和免疫化学等相关领域。具体的讲本发明涉及一种猪圆环病毒2型乳胶凝集检测方法及应用。

背景技术

猪圆环病毒病是一种近年来倍受关注的在世界各地广泛流行的疾病，是由猪圆环病毒2型引起的一系列疾病的总称。自1974年Tischer等首次发现猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)以来，随着对PCV研究的深入，根据PCV的致病性及其基因组差异又可将其分为无致病性的猪圆环病毒1型(PCV1)和有致病性的猪圆环病毒2型(PCV2)。PCV1对猪无致病性，但能产生血清抗体，在猪群中普遍存在。PCV2可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪间质性肺炎、猪皮炎肾病综合征以及母猪繁殖障碍等症状。PCV2可导致母猪返情率增高，流产，产死胎、木乃伊胎和弱子等，所产仔猪断奶前死亡率上升。公猪感染PCV2后，可通过交配传染给与配母猪，从而导致其繁殖障碍。除此之外，PCV2可致使感染猪的免疫力大大降低，从而为其他病毒或病菌的入侵创造了条件。如PCV与蓝耳病病毒协同作用，使猪继发感染金色葡萄球菌、链球菌时，从而使病猪出现体温升高、充血性皮疹、呕吐、腹泻、呼吸困难等症状。PCV2对猪业的发展造成了重大的经济损失，因此，研究PCV2的检测方法对于这些疾病的早期诊断、控制、预防、治疗及减少经济损失均具有重大的理论和实际意义。猪群中普遍存在着PCV抗体，单一的抗体阳性不能确诊为阳性，确诊必须依靠实验室方法检测出PCV2抗原或核酸。由于病毒复制困难，所以检测和防控研究非常困难。同时，该病易与一些病毒性和细菌性疾病混合或继发感染，因此仅凭症状、病变及流行病学调查很难做出准确判断。为此，国内外兽医工作者以及科学家进行了大量的研究，建立了多种高度特异性的病毒学、免疫学和分子生物学诊断方法，但迄今为止，尽管有多种检测PCV的方法，但各种方法都有其局限性，检测结果及其判定经常受多种因素的影响。如：病毒分离技术，由于病毒在培养细胞上不出现细胞病变，通常在病料接种后3天才会出现结果；通过免疫组织化学染色法(IHC)、聚合酶链式反应(PCR)或电子显微镜观察，确认病毒分离情况，病毒分离费时费力，不适于疾病检测的；免疫组化法(IHC)，操作比较烦琐，时间较长，且必须在实验过程中除去内源过氧化物酶对反应的干扰；原位杂交(ISH)，敏感性高，可以精确定位PCV病毒DNA在细胞中的部位，为进一步深入研究PCV的致病机理提供了帮助，但缺点是费时费力，非特异性比较强；间接免疫荧光实验(IFA)，该方法在PCV的抗体检测中应用广泛，国外已有标准化试剂盒问世通过检测猪血清中的病毒抗体，确定PCV感染情况，但此方法不能有效区分抗体是针对PCV1还是PCV2；免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)，该方法不能区分PCV两种血清型，应用较为局限，国内很少使用该方法；酶联免疫吸附实验(ELISA)、抗原捕获ELISA等虽然最近很受吸引，在某些方面有些优势，但仍然有关于仪器、费用等方面的原因不能普遍使用。此外还用许多方法也由于存在一些缺陷而还不能造福于世界以及我国的猪业的发展。所以现在急需一种灵敏、快速、低成本、对猪本身没有副作用，而且还能得到有效普及的检测方法。乳胶凝集试验(LAT)由于其快速、简单和无需专门的技能和任何仪器设备而具有巨大优势。

从上个世纪中叶聚苯乙烯乳胶颗粒开始做凝集试验的材料以来，由于其具有的独特优点，如：操作简便，不需要特殊仪器，肉眼判断，也不需要对操作过程进行培训；时间短，一般在2分钟内可以出结果；价格低廉，检测单份血清样品比其它血清学、病原学方法便宜的多；适用于现场检测等，在临床检验中得到了广泛的应用。传统的乳胶凝集试验是以惰性聚苯乙烯乳胶颗粒作载体，吸附特定的抗原或抗体，当遇到相应的抗体和抗原成分时，会形成肉眼可见的凝集颗粒。在利用乳胶凝集技术建立病原学检测方法时，一般是将特异性抗体致敏到乳胶颗粒表面，普通聚苯乙烯乳胶和抗体的结合是无选择性的物理静电吸附，由于抗体的分子量小，很难结合到乳胶表面，即使致敏上的抗体也容易从乳胶颗粒上脱落或者变性失活，导致致敏好的乳胶试剂保存期短，难以适合产品开发的需要。为此，本申请人以带有磺酸基的三元聚合物乳胶颗粒为载体，将抗体偶联到乳胶表面。本发明的方法克服了普通乳胶致敏抗体时，致敏量少，不稳定，抗体容易脱落等缺点，提高了抗体的结合效率，而且致敏上的抗体不容易从乳胶上脱落，进而提高乳胶的敏感性和保质期，适合了产品开发和大规模生产的要求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，建立一种快速检测猪圆环病毒2型的乳胶凝集方法及应用。