[发明专利]一种猪圆环病毒2型的乳胶凝集检测方法及应用

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞株PCV2/3E5，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C201043。

2.一种由保藏编号为CCTCC-C201043的杂交瘤细胞株分泌的能够专门识别猪圆环病毒2型的单克隆抗体。

3.包含权利要求2所述的单克隆抗体的乳胶诊断试剂，所述的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC-C201043的杂交瘤细胞株分泌的。

4.一种猪圆环病毒2型的乳胶凝集检测方法，包括制备乳胶溶液、乳胶诊断试剂、阳性对照样品、阴性对照样品，其特征在于，它是由下列步骤制备的：

A、用猪圆环病毒2型免疫小鼠得到免疫血清，从该免疫血清中提取并得到保藏号为CCTCC-C201043的单克隆抗体，用该单克隆抗体制敏乳胶得到所述的乳胶诊断试剂；和

B、乳胶溶液的制备由下列步骤获得：

1)取14.1mL苯乙烯、0.78mL甲基丙烯酸甲酯和100mL去离子水于250mL三口烧瓶中，混合搅拌，通氮气保护；

2)待瓶中液体温度升至70℃时，将混合液A快速加入瓶中于70℃下聚合2-4小时后，加入混合液B，再聚合4-6小时，得到均一乳胶；

3)取1mL的乳胶在10000r/min的条件下离心，去掉上清液；在沉淀中加pH为7.4的磷酸缓冲液1mL，得到均匀的乳胶溶液；

其中

步骤3)所述的磷酸缓冲液组分为：氯化钠8g，磷酸氢二钾0.2g，磷酸氢二钠1.15g，氯化钾0.2g，补充去离子水至1000mL，pH7.4；

步骤2)所述的混合液A组分为：碳酸氢铵0.506g，甲基丙烯酸丙基磺酸钾0.1-0.4g，硫代硫酸铵0.73g，加去离子水10mL；

步骤2)混合液B组分为：苯乙烯2.81mL，甲基丙烯酸甲酯0.6mL甲基丙烯酸丙基磺酸钾0.5g，碳酸氢铵0.1g，加去离子水10mL；

所述的阳性样品为灭活的猪圆环病毒2型WH，所述的阴性样品为不含猪圆环病毒2型的猪血清。

5.权利要求4所述的检测方法的应用，其特征在于，

1)在权利要求4所得的乳胶溶液中加入10μl保藏号为CCTCC-C201043的杂交瘤细胞株PCV2/3E5所分泌的单克隆抗体，将该乳胶-单克隆抗体混合溶液稀释2倍体积，置于25℃恒温箱中放置70min，得到乳胶诊断试剂；

2)将收集得到的猪血液于37℃存放1小时，于5000r/min离心，得到待检的猪血清；

3)于干净的载玻片上分别滴加10μl待检的猪血清、权利要求4所述的阳性样品和阴性样品，再向所述的猪血清、阳性样品、阴性样品中滴加10μl权利要求4所述的乳胶诊断试剂，搅拌均匀，摇动30秒后观察结果。

6.权利要求2所述的单克隆抗体在制备猪圆环病毒2型的乳胶凝集检测试剂盒中的应用。