[发明专利]牛虻抗血栓酶tablysin及其基因和应用有效
申请号: | 201010533724.4 | 申请日: | 2010-11-05 |
公开(公告)号: | CN102071184A | 公开(公告)日: | 2011-05-25 |
发明(设计)人: | 赖仞;马冬莹 | 申请(专利权)人: | 中国科学院昆明动物研究所 |
主分类号: | C12N9/64 | 分类号: | C12N9/64;C12N15/57;A61K38/48;A61P7/02 |
代理公司: | 昆明今威专利代理有限公司 53115 | 代理人: | 杨宏珍 |
地址: | 650223 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 牛虻 血栓 tablysin 及其 基因 应用 | ||
技术领域:
本发明提供一种牛虻抗血栓酶tablysin及其基因和应用,属于生物医学技术领域。
背景技术:
血栓栓塞性疾病严重影响人类的健康,是导致死亡率最高的病因之一。在过去的几十年中,已经开发的抗栓药物主要包括溶栓药、抗凝药和抗血小板药。但是许多抗血栓药物经常被包括低血压、出血等系统性的副作用所限制,因此,需要开发新型的更具潜力和特异性的抗血栓药物。
中医药研究表明,许多来源于动植物的天然组分具有确切的抗血栓作用,《本草纲目》、《金匮要略》等古籍医书就记载有许多活血化瘀的药方。中药是祖国医药学的重要组成部分,其功效已为几千年的历史和现代临床疗效所肯定。虻科昆虫俗称牛虻(horsefly),隶属于节肢动物门双翅目短角亚目虻科,是重要的医学和兽医学昆虫。其成虫是一种中药材,俗称虻虫,具有活血化瘀,破积通经的功效,其药用历史悠久,能为开发现代新药提供靶标和启示。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种牛虻抗血栓酶及其基因和应用。
本发明的技术方案包括牛虻抗血栓酶tablysin的制备和氨基酸序列测定,牛虻抗血栓酶tablysin基因的克隆,Tablysin的体外重组表达和牛虻抗血栓酶tablysin的药理实验四部分内容。
牛虻抗血栓酶tablysin是我们首次从牛虻唾液腺中分离得到的一种活性蛋白质,分子量约27KDa。其全序列一级结构为(氨基酸序列为SEQ ID NO:1):MTSIPVSSFSLATLVLQYATIDAVDYCRLPCRGNNYHVGCREPAYAQECGQSPRTRELLKEHRNEILSKIIDVRDHVAKGSWALPVAAGMKVVVWDAELAGLAKRHTKACVGETLECRNTERLFAPGYLNFKYSGDKLPRIMELIDAAVKKGHLQRHNITREIIESYRDNGPDGTVKELALAISERVTAVGCGLTTWQDGAKARALLTCNFSSQNTRGRPVYKVGNSPGDFCIEKDETYTNLCSATEPIDPNKSN
牛虻抗血栓酶tablysin基因的克隆包括:牛虻唾液腺总RNA提取,mRNA纯化,mRNA反转录及cDNA文库构建,设计引物,利用PCR方法筛选编码基因。基因测序结果表明编码唾液腺牛虻抗血栓酶tablysin基因由768个核苷酸(SEQ ID NO:2)组成,自5’端至3’端序列为:
atgacttccataccggtgtccagcttttcacttgcgaccttagtactacaatacgcaact 60
atcgacgcagttgactactgtagattaccttgtcgagggaataattaccatgtggggtgt 120
cgtgagccagcgtatgcccaggaatgtggccaaagtccaagaactcgcgagttattgaag 180
gagcatagaaatgagatattgtcgaagataatcgatgtgcgagatcatgtggccaaggga 240
tcatgggcactaccagtggcagccggaatgaaagttgttgtatgggatgcggagctcgct 300
ggtttagccaaacgacatacaaaggcatgcgttggagagacacttgagtgtcgaaacaca 360
gaacgtctctttgctccaggctatctaaacttcaaatactccggtgacaaattgccgcga 420
attatggaacttattgatgctgcagtcaaaaaaggccacttgcaaaggcataatatcacg 480
agagaaattatagagagctacagggacaatggacctgatgggactgtcaaggaacttgcc 540
ttggccatatctgaacgagtcaccgctgttggctgcggactaactacttggcaggatgga 600
gcaaaggctcgcgcacttcttacgtgtaacttctcctcgcagaacactcggggtcgtcct 660
gtctacaaagtcggcaatagtcctggcgatttttgcatcgagaaggatgaaacgtataca 720
aacttgtgctctgctactgaacctatcgaccctaataaatctaactag 768
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