[发明专利]一种检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物化学试剂盒及检测方法，具体说是一种检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒及检测方法。

背景技术

人类精浆中约有30％来自前列腺，前列腺功能对男性生育有着重要意义。精浆酸性磷酸酶(ACP)活性检测被认为是评价男性前列腺功能的重要指标之一，前列腺炎时ACP活性常降低，ACP亦可作为前列腺癌的诊断和治疗指标。精浆ACP具有免疫抑制作用，是精浆免疫抑制剂的重要组分。此外，ACP还可以作为精液异常液化的实验指标，并在法医学强奸案的判定方面有着广泛应用。

目前，我国部分男科实验室开展了精浆酸性磷酸酶活性的检测，使用的方法为手工法。这是基于酸性磷酸酶在酸性条件下分解磷酸苯二钠产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化成红色醌的衍生物，根据红色深浅测出酶活力的高低。在具体操作过程中稀释精浆样品先与枸橼酸缓冲液在37℃温育5min，然后再与磷酸苯二钠基质液37℃温育15min，最后加入碱性溶液终止反应和铁氰化钾溶液显色，用分光光度计比色，然后根据标准曲线手工计算出结果，每次检测需用枸橼酸缓冲液0.5ml，稀释精浆样品10μl，磷酸苯二钠基质液0.5ml，碱性溶液1ml，铁氰化钾溶液1.5ml。该法操作步骤较多，试剂用量较多，而且需做标准曲线，较难在临床常规检测中广泛使用。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了提供一种能使检测精浆酸性磷酸酶活性时操作简便、省时、节省试剂、结果稳定可靠、能广泛适用于临床检测的检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒及检测方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所述的一种检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒，包括基质液、标准品、终止液和显色剂；所述基质液是浓度为0.01mol/L的磷酸苯二钠基质液；所述终止液为碱性溶液；所述标准品为酚标准溶液，其浓度为1mg/ml；所述显色剂为铁氰化钾溶液。

按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述基质液为50ml±2ml，酚标准溶液为0.4ml±16μl，终止液为20ml±0.8ml，显色剂为30ml±1.2ml。

在1L所述碱性溶液中含有21g碳酸氢钠、0.5g 4-氨基安替比林和10g氢氧化钠。

在1L所述铁氰化钾溶液中含有2.5g铁氰化钾和17g硼酸。

用检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒检测精浆酸性磷酸酶活性的方法，该方法包括如下步骤：

1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；

2)在空白管中加入磷酸苯二钠基质液，在标准管中加入标准品和磷酸苯二钠基质液，在样品管中加入稀释精浆和磷酸苯二钠基质液；

3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育温度为37℃；

4)再分别向步骤3)中温育好的空白管、标准管和样品管中加入相同数量的碱性溶液和显色剂，混匀，通过检测仪器进行比色，得出结果。

所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为510nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为U/ml；标准浓度为33.3U/ml；比色皿温度为37℃。

步骤2)中所述的稀释精浆是将精浆样本用生理盐水做1∶1000稀释制成的。

有益效果：与现有技术相比，使用本发明中的试剂盒以及用该试剂盒进行检测的方法，能使操作简便、省时，省去稀释精浆与枸橼酸缓冲液的温育步骤，无需制备标准曲线，无需计算，仪器能直接给出结果，碱性溶液和显色剂的用量为原来的1/5，从而节省试剂用量。采用本发明，能够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，能广泛适用于各级医院的男科实验室。

附图说明

图1为手工法和半自动生化分析仪法的检测结果相关性分析图；

图2为光密度与酸性磷酸酶活性的线性关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对发明作进一步的详细说明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1：本发明一种检测精浆酸性磷酸酶活性试剂盒，包括基质液、标准品、终止液和显色剂。所述基质液为磷酸苯二钠基质液，浓度为0.01mol/L；标准品为酚标准溶液，其浓度为1mg/ml；所述终止液为碱性溶液，在1L所述碱性溶液中含有21g碳酸氢钠、0.5g 4-氨基安替比林和10g氢氧化钠。显色剂为铁氰化钾溶液，在1L所述铁氰化钾溶液中含有2.5g铁氰化钾和17g硼酸。按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述基质液为50ml±2ml，酚标准溶液为0.4ml±16μl，终止液为20ml±0.8ml，显色剂为30ml±1.2ml。