[发明专利]一种水产品复合微生物添加剂及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种水产品复合微生物添加剂909及其制备方法与应用，属于微生物调节剂在水产养殖业中应用的生物材料技术领域。 

背景技术

随着健康无公害养殖的普及和推广，微生物制剂以其无毒害、无残留等优点，越来越受到人们的关注和青睐。利用某些微生物的代谢作用，降低养殖水体的氨氮、硫化氢含量，从而有效预防水产动物中毒，净化了水质，给水产动物创造良好的生存环境。同样，一些微生物能够促进饵料的转化，进而营养成分被养殖动物吸收利用，间接促进养殖动物的生长。 

水产品复合微生物添加剂909的研发，采用适合水产养殖环境的微生物菌种，充分发挥了微生物物质代谢的功能，通过多菌种间协同作用起到对水产养殖增产增效增收的目的。 

发明内容

本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物菌剂，利用该复合微生物菌剂制成水产品复合微生物添加剂909应用在水产养殖业。菌剂进入水产动物体内，形成优势种群，参与肠道微生物的平衡，提高饵料利用率和动物生长速度，提高动物机体非特异性免疫功能，防病抗病。 

本发明的技术解决方案如下：一种水产品复合微生物添加剂909采用产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis) ATCC No.19435，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10~35%。 

所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备步骤如下： 

1.接种：将所述各菌种接于斜面培养基上。产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；乳酸链球菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h； 

2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH为6.0～8.0。锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10⁸个/mL；

3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到10⁸个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；

4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH6.0～8.0，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到5～10×10⁸个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。

所述液体培养基配方为： 

1.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，琼脂15 g，高压灭菌30分钟；

2.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0 g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括（六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化

钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g），添加乙酸调节pH，水适量；

3.嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨 10g、蛋白胨10g、

酵母膏 5g、葡萄糖5g 、吐温80 1g、K₂HPO₄2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MgSO₄·7H₂O0.2g、MnSO₄·H₂O 0.05g、水1000ml；

4.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为：牛肉膏 5g、蛋白胨10g、Nacl 3g、pH 7.0。