[发明专利]一种采用微板和嗜热脂肪芽孢杆菌检测抗生素残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于动物源食品，特别是鲜奶中抗生素残留检测的方法。

背景技术

随着生活水平的提高，人们对自身和亲人的健康都越来越重视，大都养成了“药补不如食补”的习惯，但这些食补原料的安全性却越来越令人担忧。自20世纪90年代以来，药物残留超标已使我国出口动物性食品屡屡被拒，2002年初，欧盟宣布全面禁止进口中国的虾、兔和家禽肉等动物性食品和水产品，由此导致2002年上半年中国水产品出口下降70％以上。同年，出口欧盟的蜂蜜中氯霉素超标，造成了浙江省为主的出口企业数亿美元的损失。消费者的餐桌上更是危机四伏。农业部日前对某市生猪市场抽检报告显示，该市市场上近两成猪肉抗生素残留超标。全球每年消耗的抗生素总量中90％被用在食用动物身上，且其中90％都只是为了提高饲料转化率而作为饲料添加剂来使用。有关资料显示，基于利益的驱使和监管的漏洞，滥用抗生素已成为农畜养殖业的“恶性肿瘤”。

我国对抗生素危害性问题的重视起步较晚，在我国1996年颁布的食品卫生标准中，对兽药的残留检测还只限于四环素族抗生素一项。2002年无公害食品计划开始实施，农业部以法规形式规定了无公害食品(猪肉、鸡肉、水产品等)中兽药使用的规范和最高残留限量。确定了包括4种氟喹诺酮类药物即恩诺沙星、二氟沙星、达氟沙星、沙拉沙星和氟甲喹等抗菌素在内的共60余种兽(渔)药的使用准则，但是同时颁布的标准检测方法却极为有限，在肉食中推出的标准检验方法仅有不到10种。动物性食品的安全问题已成为人们关注的健康问题。而至今，我国尚未对动物性食品中抗生素污染情况进行全面调查和经常性监测。随着全社会和政府部门对动物源食品抗生素超标问题的重视，研究开发一些简单、快速、经济和便携化的能检测多种抗生素残留的分析技术是发展的必然趋势，尤其在质检机构进行大样本量的筛选工作中尤为需要一种高效率，低成本的抗生素检测方法，这也必然将提高我国食品抗生素检测水平，为我国经济和社会的稳定发展提供保障。

动物性食品中抗生素残留检测方法主要有微生物检测法，理化检测方法，如高效液相色谱法，气相色谱法和薄层色谱法等和免疫分析法三类。

薄层色谱法(TLC)操作简单，结果可靠，但仍需要复杂的样品前处理，灵敏度不高。HPLC和GC等方法较之微生物法有高度的灵敏度和特异性，具有高效，快速，灵敏度高，检出率高等特点，但设备昂贵，对试验人员也有较高的要求，分析费时而不易推广，同时它还需要复杂烦琐的样品前处理且不能同时筛选大量的样品。免疫分析法灵敏度高，特异性比微生物法强，单抗的特异性更高，但是检测成本要求较高，不易于推广。

微生物法是测定抗生素残留的经典方法，原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，定性或定量确定样品中抗生素的残留，目前的微生物法主要有棉签法、杯碟法和纸片法，这些方法普遍适用于抗菌药物的残留测定，操作相对简单，费用低，一般的实验室都能操作，适用批量样品快速筛选，但常缺乏专一性和精确度，且受到其它抗生素的干扰。尽管微生物法存在一些不足，许多发达国家都有一套用微生物法快速检测可食性动物组织和食物中抗生素残留的方法，尤其是对紫外没有特征吸收的氨基糖苷类抗生素，微生物效价法是当前各国药典测定该类抗生素含量的主要方法。同时，一些公司已将微生物抑制法试剂盒商品化，如BSDA、Charm&receptor assay及ECLIPSE等，检测限可能满足欧盟的最大残留限量标准。

在我国，微生物法被用于国家标准和部颁标准中，用于检测动物性食品中的抗生素残留。但是采用的一些方法精确性和时效性都相对较差，已经无法满足现在的检测要求，而对微生物法的改进研究也较少，因此，借鉴微板微生物法在杀菌剂、防腐剂开发，和化合物风险评价中的技术，及国外开发微生物试剂盒的先进经验，开发高效、灵敏、廉价的基于微板的微生物法检测动物性食品中的抗生素残留，广泛应用于质检、农产品监督管理、商检和卫生部门，并且为开发拥有自有知识产权的试剂盒打下技术基础。

发明内容

本发明要解决的技术问题是建立一种简单、快速、灵敏度高、能够普遍推广应用的抗生素残留微生物检测方法。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

(1)菌种活化

准备牛肉膏蛋白胨培养基备用，在无菌条件下，挑取一环嗜热脂肪芽孢杆菌用划线法接种至牛肉膏蛋白胨斜面，放入55℃的恒温培养箱中培养24h。本次试验复苏后的菌种在1-2天后使用。

(2)摇菌及转接