[发明专利]血清中胆固醇酯的两步酶测定方法

权利要求书

1.一种血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I中含有双色原物质、胆酸钠、抗坏血酸氧化酶、POD、胆固醇氧化酶、表面活性剂及适量防腐剂；试剂II内含有胆固醇酯水解酶及适量防腐剂；其测定方法为：待测血清样品先与试剂I于37℃温浴3～5分钟，血清中游离胆固醇与试剂I反应生成醌亚胺，加入试剂II后于37℃温浴4～7分钟，胆固醇酯水解后产生胆固醇，经反应也生成醌亚胺；仪器在500nm～520nm波长处检测，以试剂I反应产生的醌亚胺为空白，从试剂II反应产生的醌亚胺计算出胆固醇酯的含量，计算公式为：

OD_CHE＝OD₂-OD₁×[SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]

胆固醇酯浓度＝F×OD_CHE

其中OD_CHE是胆固醇酯产生的吸光度，OD₁是样品加入试剂I反应后测得的吸光度，OD₂是样品加入试剂II反应后测得的吸光度，SV是血清样品的体积，R₁V₁是试剂I的体积，R₂V₂是试剂II的体积，F是校正因数。

2.根据权利要求1所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I中双色原物质一个为4-氨基安替比林，另一个选自2，4-二氯酚、4-氯酚、苯酚衍生物、苯胺盐和苯磺酸盐中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I中表面活性剂选自TritonX-100。

4.根据权利要求1所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I及试剂II中防腐剂选自Proclin-300。

5.根据权利要求1所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I每升Tris-HCl缓冲液内含Tris 100mmol～200mmol、2，4-二氯酚2.0mmol～4.0mmol、4-氨基安替比林0.8mmol～2.4mmol、胆酸钠3.0mmol～5.5mmol、TritonX-1000.08g～0.15g、抗坏血酸氧化酶1000U～1200U、POD 800U～1600U、胆固醇氧化酶800～1600U、Proclin-300100μl～300μl；试剂II每升Tris-HCl缓冲液内含Tris100mmol～200mmol、胆固醇酯水解酶800U～2400U、Proclin-300100μl～300μl。

6.根据权利要求5所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于试剂I和试剂II中Tris-HCl缓冲液的pH值为7.7±0.2。

7.根据权利要求1所述的血清中胆固醇酯的两步酶测定方法，其特征在于测定所用各物品的体积比为：样品∶试剂I∶试剂II＝1∶75～80∶25～20。