[发明专利]甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固相萃取柱的制备方法，具体地讲，涉及一种甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的制备方法。

背景技术

甲基睾酮是一种人工合成的代谢类固醇，作为一种促生长剂，上个世纪一直广泛应用于畜牧业与水产中。但是由于甲基睾酮代谢缓慢，蓄积性强，通过食物链进入人体，会产生严重的副作用，诸如：肝中毒，胎体中毒、致癌等。欧盟早在1988年就开始禁止使用类固醇激素诸如甲基睾酮来饲养家畜。而在我国，从1999年起也已经法令禁止使用甲基睾酮作为促生长剂。但是到目前为止，仍有少数企业在违规使用。要彻底避免这种情况的发生，除了从源头上控制兽药的生产和使用之外，及时准确地检测畜禽产品中兽药残留也是关键环节，但如何有效富集样品中的痕量兽药残留一直以来都是研究热点。

分子印迹技术(Molecular Imprinting Technology)的迅速发展始于上世纪90年代，用于制备具有高亲和性和选择性的可以识别和结合目标分子的特定受体，即分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers，MIPs)。由于孔穴对模板分子的记忆功能，MIPs对模板分子的亲和力大大增强，表现出分子识别的能力。MIPs依靠形状、大小和化学功能基的分布对模板分子进行识别，类似于生物体系中酶对底物、抗体对抗原、受体对激素的作用，具有专一选择性。而且分子印迹聚合物具有制备简单、成本低廉、使用寿命长等优点，且比天然的生物分子具有更高的稳定性、更良好的机械性能和高度的交联性。更重要的是，对于那些天然受体不存在或难以得到的目标分子，用这种方法都可以量身定做。到目前为止，有机小分子包括药物分子、杀虫剂、氨基酸、肽、核苷酸碱基、甾族化合物及糖等的印迹已经取得成功；金属和其他离子也可用作模板以使功能基具有特定的排布；而体积较大的分子如蛋白质、细胞等的印迹也已经有报道。可以应用到分子印迹技术中的目标分子非常多，这也是其发展如此迅速的原因之一。分子印迹聚合物以其优越的分子识别性能被广泛应用于分离领域，包括高效液相色谱(HPLC)、毛细管电色谱(CEC)以及生物传感器、模拟抗体、模拟酶等方面，其识别过程具有预定性、特异性和实用性这三大特点。

传统的样品前处理过程通常都使用常规的固相萃取柱如C18、C8、弗罗里硅土、硅胶等来对样品中残留目标物进行富集，这类固相萃取柱的优点是通用性好，适合各种不同的样品基质，但是缺乏特异性，有可能导致回收率低。而按照机理，分子印迹聚合物作为固相萃取剂的优点为：提取快速有效，优良的选择性和亲和力，稳定性高，成本低，能够降低检测限，并使基质影响降至最低。因此可以广泛应用于制药、食品、环境等多种行业中。目前关于甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的制备方法尚未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的制备方法，该方法工艺简单，具有与甲基睾酮分子印迹聚合物本身匹配的特殊性，所制得的固相萃取柱对甲基睾酮具有很高的回收率，并且可以明显降低基质效应。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

一种甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的制备方法：以单位重量份、单位体积份为例，将甲基睾酮分子印迹聚合物100-500mg与5-10ml纯有机溶剂混合，振荡10-20min后超声10-20min，直至混合均匀，移入聚丙烯等材质的固相萃取空柱中，两端分别用滤膜垫片堵住，装填均匀后用20-30ml酸性有机溶剂上柱清洗，然后用10-20ml纯有机溶剂冲洗，以除去酸性物质，最后用惰性气体吹扫除去残余有机溶剂，所述惰性气体可以是N₂或Ar；最后干燥即得，优选为真空干燥。

所述甲基睾酮分子印迹聚合物优选为粉末状。

所述纯有机溶剂可以是甲醇、乙醇、乙腈或丙酮等中的一种或几种。

所述酸性有机溶剂可以是甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的混合溶液；甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的体积比约为1∶5-1∶20。

甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的评价：通过实际样品的检测来对甲基睾酮分子印迹固相萃取柱的性能进行评价。首先采用不同比例的甲醇-水溶液及甲醇-乙酸溶液对固相萃取柱进行清洗，对淋洗和洗脱条件进行优化。之后，分别用制备的甲基睾酮分子印迹固相萃取柱和普通的SPE柱富集自然水进行比较。

结果表明，分子印迹固相萃取柱使用15次以后，甲基睾酮的回收率略有下降，但都在90.0％以上。可见，以分子印迹聚合物作为填料制成的MIP-SPE具有较好的稳定性和耐用性能，多次使用后其识别能力仍没有降低。