[发明专利]快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。黄曲霉毒素(AFT)目前已发现20余种，其中最主要的是黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。

黄曲霉毒素污染食品及饲料后，会直接或间接进入人类食品链，威胁人类的健康和生命安全，其危害程度与黄曲霉毒素的摄入量成正比。黄曲霉毒素广泛存在于大米、玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等农产品和鱼肉等食品中，其污染食品及饲料的环节多、而且多种黄曲霉毒素往往同时存在，为此世界各国都规定了食品及饲料中黄曲霉毒素总量(黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的总量)的最大允许含量并将其作为强制性标准，因此加强对食品及饲料中黄曲霉毒素总量的检测、特别是速测，以便及时了解和掌握食品及饲料的卫生信息，是增强食品安全性的一个重要环节。

现有技术中常用的黄曲霉毒素检测技术主要有薄层层析法、精密仪器分析法、免疫学分析法。免疫学分析法克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点。其中基于纳米金的免疫层析快速检测技术具有简便、快速、灵敏、适于现场检测的优点，具有极大的应用价值和应用前景。目前已有针对黄曲霉毒素单一组分如黄曲霉毒素B1(AFB1)的快速检测试纸条问世，但是因为绝大多数被黄曲霉毒素污染的样品都不止含有AFB1一种黄曲霉毒素，从而易对检测结果造成干扰或交叉污染，并且市售黄曲霉毒素免疫层析检测试纸条灵敏度相对偏低，检测限为5-200ng/g，不能够很好地满足当前更加严格的黄曲霉毒素限量标准的检测需求。因此，研究建立一种针对黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条对于监控食品和农产品中的黄曲霉毒素具有很重要的意义和应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条及其制备方法。该试纸条用于检测黄曲霉毒素总量(黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的总量)，具有检测快速，操作简单，灵敏度高的特点。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案为：

快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条(见图1和图2)，包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线包被有黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物(AFB1-BSA)，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体，所述抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11产生。

按上述方案，所述的吸水垫长16～18mm，宽2～4mm；检测垫长25～30mm，宽2～4mm；金标垫长6～9mm，宽2～4mm；样品垫长12～18mm，宽2～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。

按上述方案，所述的吸水垫为吸水纸。

按上述方案，所述检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。

按上述方案，所述检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物(AFB1-BSA)的包被量为80～400ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为200～500ng。

按上述方案，所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15～20nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体的用量为48～144ng。

如上所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)吸水垫的制备

将吸水纸剪裁即得吸水垫；

(2)检测垫的制备

检测线的包被：

将黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物(AFB1-BSA)配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距离硝酸纤维素膜上沿为15～20mm的位置，用点喷方式将包被液A横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，每厘米检测线上所需黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物(AFB1-BSA)的包被量为80～400ng，然后于37～40℃条件下干燥8～20分钟；

质控线的包被：