[发明专利]快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条，包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线包被有黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体，所述抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11产生。

2.根据权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条，其特征在于：所述的吸水垫长16～18mm，宽2～4mm；检测垫长25～30mm，宽2～4mm；金标垫长6～9mm，宽2～4mm；样品垫长12～18mm，宽2～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。

4.根据权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为80～400ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为200～500ng。

5.根据权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条，其特征在于：所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15～20nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体的用量为48～144ng。

6.权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)吸水垫的制备

将吸水纸剪裁即得吸水垫；

(2)检测垫的制备

检测线的包被：

将黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距离硝酸纤维素膜上沿为15～20mm的位置，用点喷方式将包被液A横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，每厘米检测线上所需黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物的包被量为80～400ng，然后于37～40℃条件下干燥8～20分钟；

质控线的包被：

将兔抗鼠多克隆抗体配制成0.5mg/mL的包被液B；于距检测线5～10mm的位置，用点喷方式将包被液B横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为200～500ng，然后于37～40℃条件下干燥8～20分钟；

(3)样品垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液A中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥10～16小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存。

(4)金标垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液B中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥10～16小时，于已干燥的玻璃纤维膜上，用点喷方式将纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体溶液横向进行喷涂，每厘米喷涂长度所需纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体为48～144ng，然后真空冷冻干燥2～6h，置干燥器中室温保存；

所述的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11产生；

(5)试纸条的组装

在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1～3mm，即得快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的快速检测黄曲霉毒素总量的高灵敏度免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述的包被液A是按照下述方法配制得到的：将10～50mg市售黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物，1～2g牛血清白蛋白，1～2g蔗糖，0.02～0.05g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得；

所述的包被液B是按照下述方法配制得到的：将50mg兔抗鼠多克隆抗体，0.02～0.05g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得。