[发明专利]一种检测克伦特罗的方法及其专用化学发光免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测克伦特罗的方法及其专用化学发光免疫试剂盒。

背景技术

目前动物性食品安全已成为全世界关注的焦点，其中兽药残留问题是影响动物性食品安全的最主要因素之一，由于动物样本成分复杂，待测物浓度较低，而且大多数取样量很少，这就对分析方法的选择性和灵敏度提出了更高的要求。化学发光免疫分析(Chemiluminescence analysis，CLlA)技术将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点。CLIA不需要外来光源，具有比荧光免疫分析更高的信噪比，比常规的酶联免疫吸附检测方法的抗背景干扰能力强，其灵敏度比ELISA高1至2个数量级，检测范围可达6个数量级，自动化程度高，提高了分析方法的精密度，CLIA已经成为一种先进的痕量或超痕量物质的检测技术。CLIA在兽医学、医学、食品分析等方面将会有更广阔的应用前景。

克伦特罗(Clenbuterol，CLE)是一种β-肾上腺素受体激动剂，具有松弛支气管平滑肌的作用，主要用于治疗猪、牛等的支气管哮喘等疾病。当使用量为临床治疗剂量的5-10倍时，具有促进蛋白质合成和脂肪分解的作用，可显著体高胴体瘦肉率和饲料报酬，且对猪的饲养效应尤为明显。但是，克伦特罗毒副作用较大，欧盟和中国等国家均禁止其作为饲料添加剂使用，一些不法分子不顾消费者的健康安全，仍将其利用于畜牧生产中，导致其在畜禽产品中残留，危害公众健康。动物组织中克伦特罗残留的检测方法主要采用气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-联质谱法、酶联免疫法等。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测克伦特罗的专用化学发光免疫试剂盒。

本发明提供的一种检测克伦特罗的化学发光免疫试剂盒，包括克伦特罗特异性抗体、包被原和标准品溶液；所述包被原为克伦特罗半抗原与载体蛋白的偶联物；其结

(式I)。

所述试剂盒还包括发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和酶标抗抗体；

所述试剂盒由克伦特罗特异性抗体、包被原、标准品溶液、发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和酶标抗抗体组成。

所述克伦特罗特异性抗体为克伦特罗单克隆抗体或克伦特罗多克隆抗体，所述克伦特罗单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.3777的对克伦特罗的单克隆杂交瘤细胞株CLE分泌的抗体。

所述标准品溶液中标准品的浓度为0μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、10μg/L或100μg/L，所述标准品为克伦特罗；

所述发光液由A液和B液组成，发光液A液为过氧化氢；发光液B液为鲁米诺溶液；

所述浓缩洗涤液是将0.05g叠氮化钠和100mL浓度为0.02M、pH为7.4的磷酸盐缓冲液混合得到溶液；

所述浓缩复溶液是将0.1g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.05mol/L、pH为7.4的磷酸盐缓冲液混合得到的溶液；

所述包被缓冲液是pH值为9.6的浓度为0.03mol/L的碳酸盐缓冲液；

所述封闭液是将0.01g叠氮化钠、10g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.03mol/L、pH值为7.4磷酸盐溶液混合得到的溶液。

所述包被原是按照如下方法制备得到的：a、将每5mg克伦特罗半抗原加入2mL0.5M的硫酸水溶液中，得到的溶液称为A液；将每50mg的载体蛋白溶于4mL浓度为100mg/mL的碳酸钠水溶液中，得到的溶液称为B液；将每30mg亚硝酸钠溶于1mL水得到的溶液称为C液；在0℃条件下，将C液加入到A液中得到的混合物称为D液；

b、将D液逐滴加入到B液中，得到D液和B液的混合液；逐滴加入的方式为从开始加入时计起，6min后开始搅拌混合液，并使混合液的pH保持在9-10之间，滴加完毕后，继续搅拌反应4h，将得到的产物透析，得到所述包被原；

所述克伦特罗半抗原的结构式如式II所示：

(式II)。

所述克伦特罗半抗原为克伦特罗。

所述载体蛋白为鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白，优选为卵清蛋白；

所述酶标抗抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体。

本发明的另一个目的是提供一种检测克伦特罗的方法。

本发明提供的方法包括以下步骤：

1)样品前处理：