[发明专利]含有血管生成素-样蛋白质3ANGPTL3的组合物及其使用方法

说明书

本申请是申请日为2002年11月13日、申请号为02827192.0(国际申请号为PCT/US02/36865)、发明名称为“含有血管生成素-样蛋白质3ANGPTL3的组合物及其使用方法”的发明申请的分案申请。

发明背景

技术领域

本发明涉及Angptl3多肽以及制备和使用所述蛋白质分子的方法和工具(means)，和结合Angptl3多肽的抗体。

相关技术的描述

新血管的生长在胚胎发育和出生后发育的正常生理学过程中是一个必要条件。从已有的毛细血管增生出新血管的过程(称为血管生成)，还在实体瘤，糖尿病性视网膜病，牛皮癣，炎症和类风湿性关节炎的病理发展中起关键作用(Ferrara，Recent Prog.Horm.Res.55：15-35(2000)，讨论35-6)。

血管生成不仅依赖于生长因子，例如血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)，而且还受到包括整联蛋白在内的细胞粘附分子(CAMs)的影响。编码特异性粘附受体的各种基因的失活或在动物模型中施加封闭性抗体对内皮细胞的血管生成反应具有显著的影响(Elicieri和Cheresh，Mol.Med.，4：741-50(1998))。

细胞粘附蛋白的整联蛋白家族由15个α和8个β亚基组成，有至少22种不同的αβ异二聚体组合形式(Byzova等，Mol.Cell.，6(4)：851-60(2000))。其中，至少6种组合(αvβ3，αvβ5，α5β1，α2β1，αvβ1和α1β1)涉及血管生成(Hynes和Bader，Thromb.Haemost.，78(1)：83-7(1997)；Hynes等，Braz.J.Med.Biol.Res.，32(5)：501-10(1999))。整联蛋白促进细胞粘附并迁移到在细胞间隙和基底膜中发现的细胞外基质蛋白上。

整联蛋白αvβ3是包括玻连蛋白，纤连蛋白，血纤蛋白原，层粘连蛋白，胶原蛋白，冯威勒布兰特(Van Willebrard)因子，骨桥蛋白和MMP2的片断(PEX)等在内的广泛多种细胞外基质蛋白的受体(综述参见Eliceiri和Cheresh，Cancer J.Sci.Am.6 Suppl 3：S245-9(2000))。尽管αvβ3具有混杂的配体结合行为，但是在成年组织中并不广泛表达，仅在一些血管，肠和子宫平滑肌细胞中发现(Brem等，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，35：3466-74(1994)。该受体也在某些活化的白细胞中表达，在巨噬细胞和破骨细胞中表达，这时它在骨吸收期间起重要作用(McHugh，等，J.Clin.Invest.，105：433-40(2000))。最突出的是，在暴露于低氧和诸如血管内皮生长因子A(VEGF-A)等细胞因子的内皮细胞中，αvβ3出现上调(Suzuma等，Invest Ophthalmol.Vis.Sci.39：1029-35(1998)；Walton等，J.Cell.Biochem.78：674-80(2000))。在体内，在肿瘤肉芽组织内的血管细胞上，在伤口愈合，黄斑变性和其它新血管疾病期间观察到αvβ3表达增加。在肿瘤血管生成的各种体外和体内模型中，用单克隆抗体或配体拮抗剂封闭αvβ3导致形成钝头血管(Brooks等，Cell 79：1157-64(1994)；Eliceiri和Cheresh，Mol.Med.4：741-50(1998))。

尽管有大量的报道集中在诸如肿瘤生长或心肌局部缺血后侧副管形成等病理情况下与血管生成的调节相关的机理上，但是令人惊奇的是对于肝脏再生期间血管生成过程的作用所知甚少。经部分肝切除术(PH)后，肝细胞和非实质细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)mRNA(Mochida等，Biochem.Biophys.Res.Commun.226：176-9 issn：0006-291x(1996))，意味着VEGF借助于诱导血管生成可能在肝脏再生中起作用。然而，抗VEGF的中和抗血清不会改变损伤后的恢复率，而是导致在该模型中增生的内皮细胞和肝细胞减少(Taniguchi等，J.Histochem.Cytochem.49：121-30(2001))。与此一致，加入血管生成抑制剂TNP-470不会损害部分肝切除术后的伤口愈合，表明肝脏再生期间不需要TNP470-敏感型血管生成(Tanaka等，Br.J.Surg.，83(10)：1444-7(1996))。