[发明专利]一种紫肉甘薯红色素有效组分的分离及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医药保健领域，具体而言涉及到从紫肉甘薯总红色素中制备得到抗氧化活性强、纯度高的组分及其在药品、保健品和食品添加剂中的应用。

背景技术

目前应用于食品工业中的食用着色添加剂可分为人工色素和天然色素两大类。虽然人工色素色彩多样、着色强、着色牢固、性稳价廉，但合成色素均只能着色而无营养价值，有的对人体有害甚至存在潜在的致癌作用，因此限制了人工色素的使用种类和范围。据报道，世界各国二十世纪五十年代有100多种人工合成色素，而截止到2008年美国只允许使用9种、日本只允许使用11种、我国只允许使用9种，人工合成色素由于其固有的毒副作用被逐步被淘汰。与此相反，天然色素因其具有使用安全，无毒副作用的优点而得到越来越广泛的关注。在当今国际市场，天然色素被使用的年增长率都是在百分之十以上。虽然当下还处于合成和天然两色素共存的局面，但后者代替前者成为食品着色剂新宠将是必然趋势。而具有具着色和保健双重功能的天然色素得到逐渐认可和广泛推广。

紫肉甘薯红色素是一种相对稳定，具有很强生物活性的健康色素，研究发现紫肉甘薯里由于含有红色素而使其具有很强的抗炎症、抗突变、抗病毒、抗癌、降糖、保肝护肝、预防和治疗心脑血管疾病等生物活性，而这些药理活性很多都是与其抗氧化活性相关的。而组分纯度相对较高，结构清楚，生理活性效果显著的组分可望被开发成为新型的药品或者保健品。

红色素是自然界中最重要的一种水溶性色素之一，分布于27科72属植物中，尤以葡萄皮、黑醋栗、草莓、树莓和越橘最为丰富。但是这些原料产量都很低。而甘薯作为是世界十大粮食作物之一，其种植和产量都很大，紫肉甘薯也属于甘薯品种之一，其种植和管理技术与普通甘薯无异，产量也与一般甘薯相当，所以紫肉甘薯作为一种红色素的原料来源具有不可估量的广阔前景。我国对紫肉甘薯的种植有得天独厚的资源条件，一方面是具有悠久的甘薯种植历史与成熟的管理技术；另一方面是拥有辽阔的国土面积和适宜的气候条件。因此，建立一种对紫肉甘薯红色的抗氧化活性组分分离方法对紫甘薯及紫肉甘薯红色素的开发和产业化有着很重要的指导意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫肉甘薯红色素抗氧化活性组分的分离、检测方法。通过一次过反相硅胶柱，利用甲醇浓度从20％至40％的梯度洗脱而得到相对纯度在40％-99.8％纯度的11个组分。

一种紫肉甘薯红色素抗氧化组分的分离、检测方法，所述方法是通过一次过反相硅胶柱，利用甲醇浓度从20％至40％的梯度洗脱而得到相对纯度在40％-99.8％纯度的11个组分；所述反相硅胶是指在正相硅胶母核上接上8碳、18碳等脂肪酸链的硅胶，或以ODS、RP-冠名的硅胶材料；所述方法的具体步骤如下：

(1)反相硅胶常规柱填装：称取反相硅胶溶解于纯甲醇中，缓慢倒入玻璃层析柱柱(径高比1∶8-1∶15)中，以层析柱阀门控制每分钟1ml的流速，流出甲醇；让硅胶均匀的沉积填装入柱后，待液面高出硅胶面4cm左右时，关掉阀门，加压，让硅胶柱床平整，踏实，硅胶柱高度控制在15cm，这是分辨率和高效率的最佳平衡点；

(2)反相硅胶柱流动相平衡：用3倍柱体积含20％甲醇和3％甲酸水溶液，以1.5-2.5ml/min流速平衡硅胶柱；

(3)分离工艺：称取适量(装柱硅胶量的1/10-1/20)的紫肉甘薯总红色素于含20％甲醇和3％盐酸的溶液中充分溶解后，缓慢加入平衡好的硅胶柱；然后甲醇从20％到40％按一个百分点一个柱体积浓度继增冲洗硅胶层析柱，流速控制在2.0ml/min，紫肉甘薯红色素在反相硅胶柱上有很明显的11个色素带呈现，收集时根据色带进行收集，得到11个组分。

本发明中上样的甲醇浓度和平衡柱子的浓度都是20％甲醇，提高了分离效率和缩短了分离时间，是整个分离效率提高的基础。

(4)利用HPLC对11个组分进行纯度测试：利用YMC反相硅胶柱，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，520nm下检测，以色谱图上峰个数和峰面积及百分比进行纯度计算，11个组分的纯度在40％-99.8％.范围内。本发明引入了高效液相法的在520nm下峰个数和峰面积对分离所得组分纯度检测，这是根据紫甘薯红色素的特征紫外吸收下进行的，实验数据能能准确反映了紫甘薯红色素的含量和纯度。