[发明专利]一种猪甲型H1N1流感病毒及其用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物病毒领域，涉及流感病毒株，具体涉及一种猪甲型H1N1病毒的新毒株及其用途。

背景技术

流感病毒分为甲、乙、丙三型，甲型流感病毒最容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的。甲型流感病毒的表面抗原会经常发生细小变异，这种变异被称为“飘变”(drift)，形象地说，“飘变”就是病毒通过细小的变化伪装自己，从而达到躲避人体免疫系统识别的目的。甲型流感病毒“飘变”的结果是每年引发流感的毒株都有可能不同，人们每年都需要重新接种流感疫苗进行预防。“转变”(shift)主要是以前流行于人和动物的流感病毒基因片段重组的结果，导致一种新的病毒“亚型”出现。因为人体内几乎没有抵御这种新型病毒的抗体，所以“转变”的结果往往会导致流感的全球性大暴发。2009年4月，始发于北美的甲型H1N1流感，是北美猪重组株H1N1和欧亚猪流感H1N1病毒重组而成，它包含了人、禽、猪三个来源的基因片段，并且通过了几次重组。2009年6月，WHO宣称此次流感疫情为全球流感大流行。

甲型流感病毒是引起人、畜、禽感染的重要人畜共患病毒病原，并可在世界范围引起人群发生流感大流行。接种流感疫苗是避免患流感最有效的方法。由于流感病毒经常变异，疫苗使用中的主要问题是毒种的选择，制造疫苗的毒株力求接近流行株。目前人群流感病毒的分离主要依靠细胞培养，也有用鸡胚培养，鉴定型与亚型采用血凝抑制、免疫荧光、RT-PCR等。2009年的1月，我国浙江地区屠宰场宰杀健康猪只鼻咽拭标本分离培养，鉴定为猪甲型H1N1流感病毒。猪历来被认为是流感病毒基因发生重组的重要动物宿主，尽管人和猪H1N1流感病毒都起源于禽，但是H1N1流感病毒在猪只中的抗原性相对稳定，人群缺乏对猪H1N1流感病毒的血清抗体。因此，对猪只H1N1流感病毒遗传进化信息了解保存，对掌握流感病毒宿主间重组、溯源，丰富病毒库，完善对该病原引起感染监测体系有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供一株新的猪源甲型H1N1流感病毒，为猪、人甲型H1N1流感病毒全 基因片段变异、重组监测提供生物信息，利用该株猪源甲型H1N1流感病毒制备动物免疫血清，为甲型H1N1的HA蛋白变异提供生物信息。

本发明另一个目的是提供上述病毒株的制备方法和疫苗研究。

本发明提供了一种猪源甲型H1N1流感病毒，该病毒含有HA、NA、NP、PB1、PB2、PA、NS、M共8个片段，8个片段的核苷酸序列分别如说明书的核苷酸序列表所示。该病毒感染MDCK细胞，可致细胞产生团聚变圆、脱落现象。

本发明采用屠宰场宰杀的健康猪只鼻咽拭标本进行病毒的分离培养，单克隆荧光抗体鉴定培养物为甲型流感病毒。同时提取病毒核酸，采用HA、NA、PB1、PB2、PA、M、NP、NS的8个片段的特异引物进行8个片段全基因RT-PCR扩增，扩增产物经凝胶回收后测序。进入GenBank对8个片段全基因进行搜寻比对，证实8个基因均与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源。HA蛋白327位水解位点处氨基酸序列为“IPSVQSR↓GL”，为非高致病力毒株特征。命名为A/swine/zhejiang/26/2009(H1N1)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉市武昌珞珈山.武汉大学，保藏日期：2009年6月10日，保藏号为CCTCC NO：V201016，分类命名：流感病毒A/swine/zhejiang/26/2009(H1N1)。

具体来说，本发明提供的甲型H1N1流感病毒A/swine/zhejiang/26/2009(H1N1)，具有8个片段全基因序列和下述特征：

1)感染MDCK细胞引起细胞团聚变圆、破碎；

2)荧光标记单克隆抗体观察，显示被感染细胞有绿色荧光；

3)感染细胞培养上清能凝集鸡红细胞

4)HA全基因序列与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源

5)NA全基因序列与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源

6)PB1全基因序列与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源

7)PB2全基因序列与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源

8)PA全基因序列与A/swine/Hong Kong/NS1179/2007(H1N1)99％同源