[发明专利]使用大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素的方法

说明书

技术领域

本发明属于分离技术领域，涉及一种使用大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素的方法。

背景技术

抗生素发明以来，不仅在人类疾病的治疗和预防方面效果显著，同时在畜牧业饲料添加剂方面也发挥着巨大的作用。抗生素对动物的促生长作用是在20世纪40年代后期由Stocktadt等人发现，以后相继发现四环素类、大环内酯类、β-内酚胺类等抗生素加入饲料中，都有促进生长、增重、增产、提高饲料报酬作用。1950年美国FDA正式批准允许在饲料中添加抗生素。抗生素对于畜禽的生长和提高生产性能的作用是肯定的，而且很稳定，许多国家的畜禽业都长期应用抗生素添加剂。实践证明，合理地使用抗生素添加剂能促进畜禽生长，提高饲料转化率。同时也有报告显示，不允许在饲料中添加抗生素或其他抗菌促生长剂的国家，会造成畜牧业生产成本增加，盈利减少，同时也有可能引发诸如生态环境及国家之间的贸易战等问题。但为了避免由于抗生素的滥用引起耐药菌株大量繁殖或使药物在畜产品中的残留量增大，对畜禽生长及人体健康造成直接危害，应用畜禽专用的抗生素饲料添加剂已迫在眉睫。由于恩拉霉素具有优良的促生长和改善饲料利用率的作用，因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂。

恩拉霉素(Enramycin)，又名恩来霉素、恩霉素、安来霉素、持久霉素，是由土壤中分离出来的放线菌Streptomyces fungicidious NO.B5477发酵产生的一种多肽类抗生素，易溶于稀盐酸，微溶于水、甲醇、乙醇。市场上主要的来源是先灵葆雅公司的菌丝体预混剂。

作为饲料添加剂恩拉霉素有如下优点：

1.临床应用研究方面，与其他抗生素添加剂相比，用量少的情况下饲料系数更低，生长速度更快。2.药效学研究方面，恩拉霉素对主要的革兰氏阳性菌都具有强大的杀菌作用。恩拉霉素对乙肝病毒(HBV)抗原有较强的抑制作用，包括对乙肝e抗原(HBeAg)也有较好的抑制效果。恩拉霉素与临床上现有的抗生素或抗菌药之间不存在交叉耐药性。敏感菌几乎不对恩拉霉素产生耐药性，在实验条件下，耐药性的产生也非常缓慢，即使出现，耐药性也不稳定，而且极易丢失。3.药物残留研究方面，恩拉霉素内服极不易被吸收，药物主要通过粪便排出体外。4.毒理学研究方面，恩拉霉素毒性很低。急性毒性实验表明，恩拉霉素在口服、皮下或肌肉注射给药时实际无毒。5.恩拉霉素的盐酸盐对热、光照和潮湿有极好的稳定性。恩拉霉素在饲料中具有很高的稳定性，在室温条件下长期储藏很少降解，在制成颗粒料过程中也非常稳定，与饲料混合后在室温下长期储藏效价下降甚微。恩拉霉素在肠道内不被降解，能够保持原有的抗菌活性。

抗生素的提取主要有以下几种途径：

有沉淀法、溶媒萃取法、吸附法、离子交换色谱法、高效液相色谱法、膜分离技术、毛细管电泳、双水相技术、反胶束、超临界萃取等。其中膜分离技术、毛细管电泳、双水相技术、反胶束、超临界萃取等为近几年新开始应用的方法，成本高，没有较为成熟的工业化模式，大多在实验室小规模对个别品种进行探索。

沉淀法、溶媒萃取法、吸附法等传统方法，由于活性炭和大多数溶媒不能很好的将杂质分离，得到的物质纯度不够，从而达不到分离提取要求的效果，目前大多应用于粗提，粗品预处理阶段，配合其他方法共同应用。高效液相色谱法中，大多通过使用预柱来排除部分相关杂质，预柱常因不能再生利用而造成耗损成本比较高。目前大多数抗生素品种在分离、提取、浓缩、纯化、脱色等方面广泛应用的是色谱法。

中国发明专利申请《一种安来霉素产生菌及利用大孔树脂提取的方法》(200910032340.1)中记载用大孔吸附树脂安伯莱特XAD-4、安伯莱特XAD-16等来分离提取恩来霉素。大孔吸附树脂的吸附实质为一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。通过上述这种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。其理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物选择性好，不受无机盐类及强离子、低分子化合物存在的影响，近年来也广泛应用于中药、微生物的分离提取。但该发明方法对于菌丝体中恩拉霉素的产率只能控制在60％～71％，回收率较低，对于规模化工业生产耗损太多，含量检测方面也难满足准确度要求。