[发明专利]一种提高变构霉素发酵产量的制备方法

权利要求书

1.一种提高变构霉素发酵产量的制备方法，其特征在于所述工艺方法包括如下步骤：

(1)将放线菌菌种接入种子培养基，于27～30℃摇瓶培养20～26h后得种子液，再取种子液，接入发酵培养基在26～35℃温度条件下进行发酵培养；

(2)发酵培养50～90h后，发酵液的pH升至4.5～7时，补加前体物质，所述前体物质的补加总质量为所述发酵液的0.1％～0.3％g/mL；所述前体物质为单一下列物质之一或是按顺序补加下列任意几种物质：顺丁烯二酸酐、甘氨酸、蛋氨酸、α-酮戊二酸、丁二酸盐、丙二酸、柠檬酸、谷氨酸或2，3-二甲基马来酸酐，补加后在27～30℃继续发酵10～30小时，所述补加前体类物质以水溶液的形式加入，所述的前体类物质水溶液的浓度为10～80g/L，流速为0.2～0.8mL/min，且继续保持发酵液pH在4.0～7.0之间；

(3)发酵结束，离心分离出沉淀，再用有机溶剂浸泡沉淀5h～20小时，所述的沉淀与有机溶剂的质量体积比列为1∶3～1∶10g/ml，所述的有机溶剂为下列之一或任意比例的组合：丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷，再取有机溶剂层于旋转蒸发仪上将有机溶剂蒸发干净，剩余物质即为发酵产物变构霉样品。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述种子培养基的成分和含量为：葡萄糖8-25g/L，牛肉膏4-6g/L，酵母粉5-10g/L，NaCl 1-4g/L，K₂HPO₄ 0.005-0.01g/L，初始pH 6.5-7.0；溶剂为水。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖8～25g/L，黄豆粉20～30g/L，淀粉8～15g/L，酵母提取物5～10g/L，NaCl 1～4 g/L，K₂HPO₄ 0.01～0.05g/L，初始pH 6.5～7.0；溶剂为水。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的发酵培养是取种子液，以体积比6％～10％的接种量接种于发酵培养基中，于接入发酵培养基在26～35℃温度条件下摇床转速为150～200r/min，进行发酵培养。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的前体物质为顺丁烯二酸酐。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述前体物质以其水溶液形式补加，所述的前体类物质的浓度为40g/L，加入的流速为0.5ml/min。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤(2)将发酵液的pH升至4.5～6.5时，补加前体物质。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的放线菌菌种为Streptomyces spiroverticillatus，保藏号为CGMCC-0092，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所，100101，保藏日期为1979年12月20日。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述工艺方法包括如下步骤：

(1)将Streptomyces spiroverticillatus接入种子培养基，于28℃摇瓶培养24h后于27～30℃摇瓶培养20～26h后得种子液，取种子液，以体积比6％～10％的接种量的接种于发酵培养基中，在26～35℃温度条件下摇床转速为150～200r/min，进行发酵培养；

(2)发酵培养50～90 h后，发酵液的pH升至6～6.5时，补加前体物质，所述前体物质的补加总质量为所述发酵液的0.1％～0.3％g/mL；所述前体物质为单一下列物质之一：顺丁烯二酸酐、蛋氨酸、α-酮戊二酸，补加后在27～30℃继续发酵10～30小时，所述补加前体类物质以水溶液的形式加入，所述的前体类物质水溶液的浓度为10～80g/L，流速为0.2～0.8mL/min，且继续保持发酵液pH在4.0～7.0之间；

(3)发酵结束，离心分离出沉淀，再用有机溶剂浸泡沉淀5h～20小时，所述的沉淀与有机溶剂的质量体积比列为1∶3～1∶10g/ml，所述的有机溶剂为下列之一或任意比例的组合：丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷，静置或离心，取有机溶剂层于旋转蒸发仪上将有机溶剂蒸发干净，剩余物质即为发酵产物变构霉样品。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述的种子培养基成份及含量为：葡萄糖10g/L，牛肉膏5g/L，酵母粉10g/L，NaCl 2g/L，K₂HPO₄ 0.02g/L，初始pH 6.5；溶剂为水。

所述的发酵培养基成份及含量为：葡萄糖20g/L，黄豆粉25g/L，淀粉10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 2g/L，K₂HPO₄ 0.05g/L初始pH 6.5；溶剂为水。