[发明专利]提高转基因生物耐盐性的基因LcGST及其制备以及利用其编码的蛋白

说明书

所属技术领域

本发明属于新基因的制备，特别是指一种能提高转基因生物耐盐性的基因LcGST的制备以及利用其编码的蛋白。

背景技术

在我国，干旱、半干旱地区及盐碱地占国土面积的1/2左右，严重制约了农业的发展；在河北省，近几年来连续干旱的严峻形势以及黑龙岗地区和中西部地区土壤盐渍化和次生盐渍化程度的增加，不仅造成了一些重要农作物的大量减产，也减少了地表的植被覆盖，恶化了生态环境。随着科技的进步，利用基因工程手段改良、提高植物的抗旱、耐盐能力已经成为植物抗逆性改良的重要手段，而抗旱、耐盐基因的筛选和鉴定则是植物抗逆基因工程育种的首要基础性工作。

谷胱甘肽(glutathione，GSH)普遍存在于生物体内，含量丰富，其作为生物体内主要的还原态硫之一，在还原态硫的储存和转运、蛋白质和核酸的合成、清除自由基以及维持细胞膜的完整性等方面具有重要作用。谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferases，GSTs)是由一个大的多基因家族编码的多功能蛋白酶，能催化GSH和亲电子的异源物质发生接合反应，并在细胞各部分内源代谢中作为多种化学物质的结合蛋白和转运蛋白催化依赖于GSH的生物转化。其表达受多种环境因子的诱导，在植物的生长发育、次生代谢和抗逆中有重要作用。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种能提高转基因生物耐盐能力的谷胱甘肽S-转移酶LcGST基因。

本发明的目的之二在于提供该基因的制备方法。

本发明的目的之三在于提供利用该基因编码的蛋白。

本发明的整体技术构思是：

提高转基因生物耐盐性的基因LcGST，其序列如下：

ATGGCTGACG AGGTGGTTCT TCTTGATTTC TGGGCAAGTC CATTTGGCAT GAGAGTCAGA

ATCGCACTTG CTGAAAAGGG TATCAACTAT GAGTACAAAG AAGAGGATTT GAGGAACAAG

AGTCCTCTAC TTCTCCAATC GAACCCTGTT CACAAGAAGA TTCCAGTTCT CATCCACAAT

GGAAAACCCA TTGCTGAATC TCTGATTGCT GTTCAGTATA TTGATGAGGT GTGGAATGAT

GCATCTCCCT TGTTGCCTTC TGATCCTTAC CAGAGAGCTC AAGCTAGATT CTGGGCTGAT

TATGTTGATA AGAAGATATA TGAAATTGGT AGGAACATAA TTTGGAAGAA AAATGAAGAA

AGAGAAGCTG CCAAGAAGGA ATTCATAGAT TGCCTCAAGT TGCTGGAGGA ACAGCTCGGA

GACAAGACTT ACTTCGGAGG AGACAAGCTT GGGTATGTTG ATATAGCACT TGTTCCATTC

TACACTTGGT TTAAAGGCTA TGAGACCCTT GGCAACTTCA ACATAGAGAG TGAGTGCCCC

AAGCTCATTG CTTGGGCCAA GAGATGCCTG CAGAAAGAGA GCGTTTCAAA GTCTCTCCAT

GACCAAGACA AGATCTATGA GTTCATTGTG GAAATCAGAA AGAAGTTAGG CATCGAGTAG。

百脉根是一种建设生态农业的优质草种，在保持水土，防止土壤荒漠化等方面起到了巨大作用。百脉根具有基因组小、再生容易以及易于遗传转化等特点，近几年已被作为豆科植物中的模式植物而用于分子生物学的研究。本发明申请人利用美国国立生物技术信息中心(NCBI)中已知的大豆谷胱甘肽S-转移酶基因作为探针，在百脉根EST数据库中检索，利用DNAMAN软件对检索到的EST序列进行电子拼接，获得了含有完整开放阅读框的拼接序列，并对该基因进行了克隆。具体方法如下：

提高转基因生物耐盐性的基因LcGST的制备，制备方法包括：

(1)首先以已知的大豆谷胱甘肽S-转移酶基因的编码序列在美国国立生物技术信息中心百脉根的表达序列标签数据库中为LcGST基因寻找证据，获得同源性很高3条EST序列，序列号分别为BW597792.1、BW599863.1和BW594579.1，利用DNAMAN软件对检索获得的EST序列进行电子拼接，获得了相应的含有完整开放阅读框的拼接序列；