[发明专利]菠萝蔗糖合成酶基因Ac-Sy1、编码蛋白质以及其基因克隆方法无效
| 申请号： | 201010196680.0 | 申请日： | 2010-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN101899452A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 杜丽清;张秀梅;孙光明;谢江辉;姚艳丽 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/52 | 分类号： | C12N15/52;C12N9/00;C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 刘广生 |
| 地址： | 524000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菠萝 蔗糖 合成 基因 ac sy1 编码 蛋白质 及其 克隆 方法 | ||
1.一种菠萝果实蔗糖合成酶基因Ac-Sy1，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1。
2.一种权利要求1所述菠萝蔗糖合成酶基因Ac-Sy1编码的蛋白质，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：2。
3.一种权利要求1所述菠萝蔗糖合成酶基因Ac-Sy1的克隆方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)选用菠萝果实作为实验材料，采用改良SDS法提取菠萝果实中的总RNA，RNA含量及质量采用琼脂糖凝胶电泳检测；
(2)以获得的总RNA为模板，采用Takara公司生产的mRNA Selective PCR Kit Ver1.1进行反转录获得cDNA；
(3)根据NCBI数据库中的EST信息设计菠萝Ac-Sy1基因编码区引物：正向引物：5’-GACCGGTCTAAGCCCATCATCT-3’和反向引物：5’-ACAAGTCATAG CCTCCACCACA GT-3’，以cDNA为模板，用Takara的Ex-Taq进行PCR扩增，反应程序如下：85℃变性1min，55℃复性1min，72℃延伸2min，30个循环后，72℃延伸10min；
(4)PCR产物回收后与pGEM-T easy Vector连接，连接产物转化E.coli DH 5α感受态细胞，采用蓝白斑法筛选阳性克隆，筛选的阳性克隆经PCR进一步验证后测序，获得Ac-Sy1基因。
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