[发明专利]一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法

权利要求书

1.一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，包括：

(1)将污水按1∶100的体积比接入富集培养基，于30℃，110r/min摇床中富集培养24h；

(2)将步骤(1)富集培养后的菌株用稀释平板涂布法转接至固体分离培养基，置于30℃恒温培养箱培养24～48h，经过3次划线分离得到纯化菌株；

(3)将纯化菌株富集后，按18～23％的接种量接种到液体分离培养基，测试菌株在30℃、好氧条件下培养24h时的反硝化率，筛选出反硝化率为75％-100％的单一菌株，转接斜面培养基，4℃下保存。

2.根据权利要求1所述的一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)中的富集培养基为：蛋白胨10g，牛肉浸出粉4g，酵母浸出粉3g，NaCl 5g，蒸馏水1000ml，pH 7.4-7.6；固体培养基中加入18g/L的琼脂粉。

3.根据权利要求1所述的一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)和(3)中的分离培养基为：碳源3～5g，KNO₃2g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O 0.05g，CaCl₂0.02g，定容到1000ml，调节pH 7.4-7.6；固体培养基另外加1.8％W/V琼脂。

4.根据权利要求3所述的一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，其特征在于：所述的碳源为乙酸钠、丙酸钠、乙醇、谷氨酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖或碳酸氢钠。

5.根据权利要求3或4所述的一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，其特征在于：所述的碳源为葡萄糖，在分离培养基中的用量为5g，培养基初始pH值为7.5。

6.根据权利要求1所述的一种解鸟氨酸克雷伯菌的反硝化筛选纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)中的菌株经16S rDNA序列测定和分析比较，鉴定为解鸟氨酸克雷伯菌，命名为Klebsiella ornithinolytica N-4，同源性达到97％；菌株为短粗的杆菌，单独排列，无芽胞，无鞭毛，长度0.8-1.5微米，直径0.3-0.6微米；菌落呈灰白色，圆形；革兰氏染色呈阴性。