[发明专利]通过PCR模拟和双S形方程式确定单峰熔解温度

权利要求书

1.一种确定DNA的熔解温度，Tm的方法，所述方法包括以下步骤：

-用至少一对寡核苷酸引物扩增DNA的一部分；

-将包括所述扩增的DNA的样品的温度改变一定温度范围内部分度数，并记录荧光信号的改变，以建立代表所述扩增的DNA样品的熔解曲线的数据集；

-利用通过下述的处理模块从所述数据集中确定所述扩增的DNA样品的熔解温度：

-接收代表DNA样品的熔解曲线的所述数据集，所述数据集包括表示成数据值序列{(X₁，Y₁)，(X₂，Y₂)...(X_n-1，Y_n-1)，(X_n，Y_n)}的复数个数据点，此处的X代表温度(T)值，Y代表荧光强度值；

-确定拟合所述数据集的解析表达式；

-通过取所述解析表达式对X的导数确定导数曲线；

-确定对应于所述导数曲线的最大导数(dY/dX)值的值X_max；以及

-输出值X_max，此处的值X_max代表所述DNA样品的熔解温度，Tm。

2.权利要求1所述的方法，还包括：

-确定对应于Tm值的导数曲线的峰高；以及

-输出所述的峰高。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述的解析表达式通过以下确定：

-通过将回归方法应用于双S形函数来确定所述函数的参数来计算拟合所述数据集的曲线的逼近。

4.权利要求3所述的方法，其中所述的回归方法是Levenberg-Marquardt回归方法。

5.权利要求1至4中的任一项所述的方法，其中所述的解析表达式通过以下确定：

-将第一变换应用到数据集中，如此导致所述数据值序列{(X1，Y1)，(X2，Y2)...(Xn-1，Yn-1)，(Xn，Yn)}变成变换的序列{(Xn，Y1)，(Xn-1，Y2)...(X2，Yn-1)，(X1，Yn)}；并且

-通过将回归方法应用于双S形函数来确定所述双S形函数参数来计算拟合所述变换的序列的曲线的逼近。

6.权利要求5所述的方法，其中所述的回归方法是Levenberg-Marquardt回归方法。

7.权利要求5或6所述的方法，还包括将第二变换应用到双S形函数，所述的第二变换是第一变换的逆向。

8.权利要求7所述的方法，其中所述的第二变换包括(X1+Xn)-x形式的函数。

9.权利要求5至8中的任一项所述的方法，还包括，在计算之前：

-将所述的数据集或所述的变换的序列的X值改变第一数量(Xtrans)，以便所述变换的序列从1个单位的值开始。

10.权利要求9所述的方法，还包括，在计算以后，将双S形函数的X值改变-Xtrans。

11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中确定导数曲线包括取所述解析表达式对X的负导数。

12.用于确定DNA的熔解温度，Tm的装置，包括：

-用于接收代表来自动力学热循环仪装置的DNA样品的熔解曲线的数据集的装置，所述的数据集包括表示成数据值序列{(X₁，Y₁)，(X₂，Y₂)...(X_n-1，Y_n-1)，(X_n，Y_n)}的复数个数据点，此处的X代表温度(T)值，Y代表荧光强度值；

-用于确定拟合所述数据集的解析表达式的装置；

-用于通过取所述解析表达式对X的导数确定导数曲线的装置；

-用于确定对应于所述导数曲线的最大dY/dX值的值X_max的装置；和

-用于输出值X_max的装置，此处的值X_max代表所述DNA样品的熔解温度，Tm。