[发明专利]重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白及其制备方法无效
| 申请号： | 201010189355.1 | 申请日： | 2010-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN102093480A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 刘金毅;徐晨;田硕;周敏毅;程永庆 | 申请（专利权）人： | 北京三元基因工程有限公司;北京毕艾欧科技发展有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/18;C12N15/62;C12N15/81;A61K38/21;A61K47/48;A61P1/16;A61P31/20 |
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| 地址： | 102600 北京市大兴区北臧*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 血清 白蛋白 干扰素 融合 蛋白 及其 制备 方法 | ||
1.一种重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白，其特征在于具有序列表SEQ ID No.1所示序列。
2.如权利要求1所述的重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白的制备方法，其特征是该方法至少包括以下步骤：
(a)重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白表达基因的密码子优化及化学合成；
(b)含(a)所述表达基因的酵母表达质粒的构建；
(c)含(b)所述表达质粒的毕赤酵母转化体的构建及筛选；
(d)转化体工程菌的发酵培养；
(e)工程菌表达融合蛋白的纯化。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(a)所述的密码子优化选择酵母偏爱的密码子。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(c)中选择的毕赤酵母是毕赤酵母GS115。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(e)中所述的融合蛋白为分泌型表达。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(e)进一步包括：
(1)对(d)所得工程菌进行离心处理后将所得离心上清液进行超滤浓缩；
(2)超滤浓缩液的Blue Sepharose FF染料亲和层析纯化；
(3)前步所得洗脱液的CM Sepharose FF阳离子交换层析进一步纯化。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(1)中超滤膜孔径为30kDa。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中选择缓冲液上样，洗脱选择20mMPB+2M NaCl，pH7.0。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(3)中选择缓冲液上样，洗脱选择25mmol/L醋酸钠缓冲液+0.3mol/L NaCl pH4.4-5.0。
10.权利要求1所述的重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白在制备预防和/或治疗乙肝及乙肝病毒感染相关的疾病的药物中的用途。
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