[发明专利]人IL-15亚型蛋白及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人单抗蛋白的制备，特别涉及一种人I L-15亚型蛋白制备方法及应用。

背景技术

IL-15mRNA(interleukin 15，IL-15)广泛表达于各种组织中，包括胎盘、骨骼肌、肾脏、心脏、肺、脑、肠上皮，并同样表达于髓系的造血干细胞中比如巨噬细胞、树突状细胞。IL-15在结构上与白细胞介素2(interleukin 2，IL-2)有同源性，IL-15受体由具有高亲和力的IL-15受体a链、IL-2/15受体β链以及公共链γ链组成，因此IL-15具有一些和IL-2相近的功能，比如刺激T细胞活化和增殖，增强NK细胞杀伤活性并促进B细胞产生免疫球蛋白。最近研究发现IL-15在NK细胞、NKT细胞以及肠上皮细胞的分化、增殖、活化过程中发挥了重要作用，IL-15与IL-17对CD8记忆性T细胞的稳态调节非常重要。研究还证明IL-15通过一种特殊的“反递呈”机制来调控CD8记忆性T细胞的增殖和NK细胞的生存周期，即一种表达IL-15a链受体的细胞能够将IL-15递呈给表达IL-15β链和γ链的细胞。更多的研究表明IL-15是一种有广泛生物学功能的功能强大的细胞因子，除了对免疫系统有着重要的调节作用，在非免疫系统中也同样重要，比如对骨骼肌合成代谢也发挥重要调节作用。

由于IL-15具有强大的免疫调节功能，并对多种器官具有潜在的调节作用，因此其在体内的表达在多个水平受到严格控制。人和小鼠的IL-15基因5′调控区均包含干扰素反应因子元件(IRF-E)及NF-κB结合位点用于上调IL-15mRNA的表达。IL-15基因的调控主要发生在转录后水平，IL-15mRNA的5′UTR区域存在的多个起始密码子(小鼠为5个AUGs，人类为12个AUGs)阻碍了IL-15蛋白的有效翻译，IL-15mRNA的3′UTR区域的调控序列同样能阻止IL-15蛋白的分泌。选择性剪切也同样参与了对IL-15基因表达的调控。

早期研究发现的两种IL-15亚型编码相同的成熟蛋白，但是其信号肽之间存在区别：由48aa组成的长信号肽(LSP)从3号外显子中编码区内的真正的起始密码子开始表达，而21aa短信号肽(SSP)则由一个新产生的5号外显子中的起始密码子开始表达终止于非成熟的终止密码子。这些不同的信号肽将IL-15蛋白运输至胞外不同的位置。短信号肽IL-15亚型，蛋白翻译效率很高，但是很难分泌；而长信号肽IL-15亚型，蛋白翻译效率较低，但是能直接被运输至高尔基体并分泌。由于IL-15主要通过IL-15Ra的反式递呈发挥功能，共调节IL-15及IL-15R有可能会促使IL-15产生多种功能活性。

申请人先前申请了专利申请号为201010167604.7小鼠IL-15亚型蛋白的制备方法及其应用。由于小鼠IL-15亚型蛋白具有免疫原性，易产生抗抗体引起的过敏反应，限制了IL-15亚型蛋白的应用，而人源IL-15亚型可以克服这一点缺陷。申请人对人源IL-15亚型蛋白进行研究，发现该蛋白与鼠源IL-15亚型蛋白有73％的同源性。体外实验也已证明鼠源的IL-15亚型确实能够抑制自身免疫病患者的外周血淋巴细胞的增殖，但是从临床应用的安全性考虑，同样具有免疫抑制功能的人源IL-15亚型在临床治疗上将更为安全有效，人源IL-15亚型蛋白能够更好地与人IL-15受体结合从而发挥更有效的竞争抑制作用，因此本发明中发现并制备的人IL-15亚型蛋白将有望成为一种有效治疗自身免疫性疾病又无毒副作用的自身免疫疾病新型药物。

本发明首次于人外周血细胞处于免疫激活状态下发现该种亚型，提示该种亚型蛋白可能在免疫体系的负反馈调节中发挥重要的作用。

发明内容

发明目的

本发明目的为提供人IL-15亚型蛋白，及制备在免疫体系处于激发态下制备人IL-15亚型蛋白，通过体外实验检测其对正常IL-15蛋白的拮抗作用，提供该亚型蛋白在自身免疫性疾病等临床治疗中的应用。

技术方案

为达到上述目的，本发明具体技术方案：

一种人IL-15亚型蛋白，其特征在于其氨基酸序列为SeqNO.4；

一种人IL-14亚型蛋白，其特征在于编码基因序列为Seq NO.3。

一种制备人IL-15亚型蛋白的方法包括以下步骤：