[发明专利]人IL-15亚型蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人IL-15亚型蛋白，其特征在于氨基酸序列为Seq NO.4。

2.一种人IL-15亚型蛋白，其特征在于编码基因序列为Seq NO.3。

3.一种人IL-15亚型蛋白的制备方法，其特征包括以下步骤：

(1)扩增人IL-15亚型基因片段：取正常人外周血，制备外周血单个核细胞PBMC悬液，使用0.1μg/ml-100μg/m LPS作用24h-72h刺激，获得刺激后的外周血单个核细胞PBMC悬液，通过Trizol-氯仿法抽提总RNA；根据NCBI所公布人IL-15cDNA序列NM-000585及pET43.1原核表达载体的结构设计特异性引物Seq NO.1和SeqNO.2，经逆转录-PCR操作扩增获得人IL-15目的片段；

(2)获取人IL-15亚型基因克隆：取步骤1所得PCR产物，按照凝胶回收试剂盒说明回收IL-15基因亚型片段；将回收所得PCR产物与PGEM-T克隆载体连接、4℃连接过夜；取连接产物转化至DH10B的感受态细菌，挑菌并酶切鉴定获得阳性质粒；取该质粒进一步测序鉴定其编码基因序列Seq NO.3；

(3)构建重组人IL-15的pET43.1原核表达载体：取测序鉴定正确的步骤2所得质粒及原核表达载体pET43.1，分别进行SacI、XhoI内切酶双酶切并按照凝胶回收试剂盒说明书回收酶切所得片段；将回收所得酶切片段连接过夜，取连接产物转化感受态DH10B菌，挑菌，按照质粒小抽试剂盒说明抽提质粒酶切鉴定；

(4)pET43.1-IL-15亚型基因转化菌的表达：取鉴定正确的步骤3中重组质粒转化感受态细胞BL21(DE3)，挑取单菌落，抽提质粒，酶切鉴定，筛选正确转化的表达菌pET43.1-IL-15/BL21；

(5)纯化并获得无标签的人IL-15亚型蛋白Seq NO.4。

4.一种人IL-15亚型蛋白在制备自身免疫性疾病药物的应用。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的自身免疫性疾病为类风湿性关节炎、多发性硬化、强直性脊柱炎、炎症性肠病、难治性乳糜泄、银屑病、丙型病毒性肝炎、逆转录病毒HTLV-1相关疾病、阿狄森病、儿童哮喘、纤维肌痛、慢性疲劳综合征、甲状腺炎、血管炎、克隆病、肠炎或雷诺氏病。

6.一种人IL-15亚型蛋白在制备用于流感所致的急性肺炎治疗药物的应用。