[发明专利]一种人胰腺癌细胞系及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞系领域，特别涉及一种人胰腺癌细胞系及其应用。 

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度很高的疾病，尽管相对发病率较低，一般为9～10/100000，但在西方国家中仍是肿瘤相关死亡率最高的疾病；在我国发病率也呈逐年上升趋势。胰腺癌不易在早期发现，目前尚未发现特异的临床表现和肿瘤标志物，影像学特征亦不典型；而且由于胰腺解剖学和生物学特征，易侵犯周围脏器和发生转移，大多数患者在确诊时，已经是疾病晚期，并转移至肝、肺、脊柱、肾或肾上腺等器官，只能行探查或姑息性手术，但远期效果不理想，患者大多死于肝转移和局部复发；能进行手术切除根治者仅占5％～30％；术后复发转移早、发生率高，单一放疗或化疗的治疗效果不理想，预后极差。我国的外科统计资料显示，5年生存率仅在5％左右。 

有关胰腺癌的发生、发展、转移和耐药的生物学机制目前尚不十分清楚。目前缺少用于胰腺癌发生机理及抗胰腺癌药物开发的接近临床肿瘤生物学特性的实验材料。而运用临床肿瘤组织直接建立细胞系的成功率较低，因此，通过运用临床肿瘤标本先建立动物模型，进而通过原代培养建立的人源肿瘤细胞更接近于肿瘤的临床生物学特性，对药物的耐药性及敏感性将具有更好的预测性。 

发明内容

本发明要解决的技术问题就是针对现有的人胰腺癌细胞系存在的生物多样性低，与临床上胰腺癌的生物学性状相差较大的不足，提供一种新的人胰腺癌细胞系及其用途。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种人胰腺癌细胞，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201007。 

本发明还提供如上所述的人胰腺癌细胞的子代细胞。 

本发明还提供如上所述的人胰腺癌细胞的用途，用于在哺乳动物中产生胰腺癌。所述的哺乳动物可以是各种哺乳动物，优选裸小鼠。所述的裸小鼠优选BALC/c裸小鼠。所述的胰腺癌优选胰低分化或中分化腺癌。 

本发明还提供一种上述人胰腺癌细胞系的建立方法，包括以下步骤， 

1)获得新鲜的临床胰腺癌手术切除标本，切成20～50mg的小块，皮下穿刺接种哺乳动物； 

2)穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。 

其中，所述的哺乳动物、所述的胰腺癌都如上所述。 

所述的新鲜的临床胰腺癌手术切除标本较佳的用哺乳动物细胞培养液或生理盐水漂洗后再进行接种。较佳的用新鲜的HBSS缓冲液(含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸链霉素和1.25μg/ml两性霉素B)漂洗。 

所述的接种的方式可以是皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种。对于胰腺癌较佳的是进行皮下穿刺接种。 

所述的原代培养方法可以是常规的哺乳动物细胞的原代培养方法。较佳的包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO2条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入DMEM/F12培养液(含5％胎牛血清，10μg/ml重组人胰岛素，6.7ng/ml亚硒酸钠，5.5μg/ml转铁蛋白，2μg/ml乙醇胺，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)，静置培养； 

所述的传代培养方法可以是常规哺乳动物细胞的传代培养方法。较佳的包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，加入新鲜的DMEM/F12培养液，仔细吹打，使之脱离瓶壁形成细胞悬液；少量在瓶壁上变圆但没有脱落的细胞，用无菌细胞刮刀轻轻挂擦培养瓶表面，收集全部细胞，离心，分别接种于新的培养瓶；当细胞传代到第五代以后，将培养液更换为RPMI 1640培养液(含10％胎牛血清，10μg/ml重组人胰岛素，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)。 

本发明还提供一种筛选治疗胰腺癌的候选药物的方法，包括以下步骤：将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胰腺癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胰腺癌的候选化合物，其中所述的动物模型具有如上所述的人胰腺癌细胞所导致的胰腺癌肿瘤。 

具体的，本发明的筛选治疗胰腺癌的候选药物的方法包括以下步骤： 

(1)将所述的胰腺癌细胞或其子代细胞制备成细胞悬液，接种于哺乳动物皮下，进行饲养，获得人胰腺癌动物模型； 

(2)将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胰腺癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胰腺癌的候选化合物。