[发明专利]基因修饰微生物及以此微生物生产衣康酸的方法

权利要求书

1.一种基因修饰微生物，包括：

第一外源性核酸序列，其编码顺式乌头酸脱羧酶(CAD)，该第一外源性核酸序列连接至启动子，以及

突变之内源性icd基因，其编码异柠檬酸脱氢酶，该突变之内源性icd基因的柠檬酸脱氢酶表达量低于其野生型的表达量。

2.根据权利要求1所述之基因修饰微生物，其中该微生物选自下组：曲霉(Aspergillus)、柠檬酸杆菌(Citrobacter)、棒状杆菌(Corynebacterium)、德克酵母菌(Dekkera)、肠杆菌(Enterobacter)、肠球菌(Enterococcus)、埃希氏菌(Escherichia)、欧文氏菌(Erwinia)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、克鲁维酵母(Kluyveromyces)、乳杆菌(Lactobacillus)、乳球菌(Lactococcus)、摩根氏菌(Morganella)、团泛菌(Pantoea)、果胶杆菌(Pectobacterium)、青霉菌(Penicillum)、毕赤酵母菌(Pichia)、变形杆菌(Proteus)、假单胞菌(Pseudomonas)、二形性酵母菌(Pseudozyma)、红酵母菌(Rhodotorula)、沙门氏菌(Salmonella)、沙雷氏菌(Serratia)、志贺氏菌(Shigella)、酵母菌(Saccharomyces)、黑穗菌(Ustilago)及耶氏酵母菌(Yarrowia)。

3.根据权利要求2所述之基因修饰微生物，其中该微生物包括黑曲霉(Aspergillus niger)、土曲霉(Aspergillus terreus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、担子菌类酵母菌(Pseudozyma Antarctica)、解脂耶氏酵母菌(Yarrowialipolytica)或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

4.根据权利要求1所述之基因修饰微生物，还包括第二外源性核酸序列，其编码选自磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、柠檬酸合成酶、2-甲基柠檬酸合成酶、柠檬酸裂解酶、乌头酸酶及2-甲基柠檬酸脱氢酶中的至少一种多肽，且该第二外源性核酸序列连接至启动子。

5.根据权利要求4所述之基因修饰微生物，其中该微生物为大肠杆菌(Escherichia coli)，该第二外源性核酸序列编码磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、柠檬酸合成酶或乌头酸酶，且该乌头酸酶为乌头酸酶A或乌头酸酶B。

6.根据权利要求4所述之基因修饰微生物，其中该第二外源性核酸序列编码磷酸烯醇丙酮酸羧化酶，且该微生物还包括第三外源性核酸序列，其编码选自柠檬酸合成酶、2-甲基柠檬酸合成酶、柠檬酸裂解酶、乌头酸酶及2-甲基柠檬酸脱氢酶中的至少一种多肽，该第三外源性核酸序列连接至启动子。

7.根据权利要求6所述之基因修饰微生物，其中该微生物为大肠杆菌(Escherichia coli)，该第三外源性核酸序列编码柠檬酸合成酶或乌头酸酶，且该乌头酸酶为乌头酸酶A或乌头酸酶B。

8.根据权利要求4所述之基因修饰微生物，其中该第二外源性核酸序列编码柠檬酸合成酶、2-甲基柠檬酸合成酶或柠檬酸裂解酶，且该微生物还包括第三外源性核酸序列，其编码乌头酸酶或2-甲基柠檬酸脱氢酶，该第三外源性核酸序列连接至启动子。

9.根据权利要求8所述之基因修饰微生物，其中该微生物为大肠杆菌(Escherichia coli)，该第二外源性核酸序列编码柠檬酸合成酶，该第三外源性核酸序列编码乌头酸酶，且该乌头酸酶为乌头酸酶A或乌头酸酶B。

10.根据权利要求6所述之基因修饰微生物，其中该第三外源性核酸序列编码柠檬酸合成酶、2-甲基柠檬酸合成酶或柠檬酸裂解酶，且该微生物还包括第四外源性核酸序列，其编码乌头酸酶或2-甲基柠檬酸脱氢酶，该第四外源性核酸序列连接至启动子。

11.根据权利要求10所述之基因修饰微生物，其中该微生物为大肠杆菌(Escherichia coli)，该第三外源性核酸序列编码柠檬酸合成酶，该第四外源性核酸序列编码乌头酸酶，且该乌头酸酶为乌头酸酶A或乌头酸酶B。