[发明专利]一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法

权利要求书

1.一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，步骤包括：

(1)向待测样品中加入免疫化超顺磁纳米粒子，15～35℃混合反应10～60min，使免疫化超顺磁纳米粒子与阪崎肠杆菌发生特异性结合；

(2)在外加磁场吸引作用下，收集免疫化超顺磁纳米粒子，洗涤后加入免疫化荧光量子点，15～35℃混合反应10～60min，使之与载于免疫化超顺磁纳米粒子的阪崎肠杆菌发生特异性结合；

(3)利用外加磁场作用吸附收集载于免疫化超顺磁纳米粒子的阪崎肠杆菌与免疫化荧光量子点结合物，洗涤后定性或定量荧光检测；

所述免疫化超顺磁纳米粒子为以四氧化三铁纳米粒子为内核，以二氧化硅为外壳，表面偶联特异性抗体的磁性粒子；所述的特异性抗体为抗阪崎肠杆菌多克隆抗体或抗阪崎肠杆菌单克隆抗体；

所述的免疫化荧光量子点为与联特异性抗体连接的量子点，所述的特异性抗体为抗阪崎肠杆菌多克隆抗体或抗阪崎肠杆菌单克隆抗体。

2.权利要求1所述一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，所述免疫化超顺磁纳米粒子的制备方法包括：

(i)将包裹二氧化硅的四氧化三铁磁性纳米粒子分散在有机溶剂中，与N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲基硅烷反应，得到表面氨基化的磁性纳米粒子；N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲基硅烷与包裹二氧化硅的四氧化三铁纳米粒子比例为0.05～0.1ml/g；

(ii)将表面氨基化的磁性纳米粒子分散于pH 7.25～7.5、并且戊二醛质量浓度为1％～2％的磷酸缓冲液中，将特异性抗体与步骤(i)所得表面氨基化的磁性纳米粒子偶联，得到免疫化超顺磁纳米粒子；所述的特异性抗体为抗阪崎肠杆菌多克隆抗体或抗阪崎肠杆菌单克隆抗体；

所述的表面氨基化的磁性纳米粒子与抗阪崎肠杆菌多克隆抗体的重量比为1∶(0.004～0.04)；

所述的表面氨基化的磁性纳米粒子与抗阪崎肠杆菌单克隆抗体的重量比为1∶(0.001～0.02)。

3.权利要求1所述一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，所述免疫化荧光量子点的制备方法包括如下步骤：

(A)将pH 7.25～7.5、含有10～50mg/ml交联剂的磷酸缓冲液的与表面修饰有羧基的量子点混合，反应5～20min以活化羧基；

(B)加入保护剂反应20～60min；

(C)加入特异性抗体混合，反应0.5～4hr，除去未反应的特异性抗体，收集免疫化荧光量子点；

所述的特异性抗体为抗阪崎肠杆菌多克隆抗体或抗阪崎肠杆菌单克隆抗体；

所述抗阪崎肠杆菌多克隆抗体与量子点的比例为1∶(4×10⁵～4×10⁶)mmol/mg；

所述抗阪崎肠杆菌单克隆抗体与量子点的比例为1∶(1×10⁵～2×10⁶)mmol/mg。

4.权利要求2所述一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，步骤(i)所述的包裹二氧化硅的四氧化三铁磁性纳米粒子粒径为50nm至150nm。

5.权利要求3所述一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，步骤(A)所述的交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐，浓度为10～50mg/ml。

6.权利要求3一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，步骤(B)所述的保护剂为N-羟基硫代琥珀酰亚胺。

7.权利要求1所述一种快速检测筛选阪崎肠杆菌的方法，其特征在于，步骤(2)和(3)所述的外加磁场为2000～6500Gs。