[发明专利]一种针对一个或多个目标基因组区域进行边扩增边连接的方法

权利要求书

1.一种针对一个目标基因组区域进行边扩增边连接的方法，包 括步骤：

1)针对一个目标基因组区域，设计包含公用接头 GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸扩增反应 的正向和反向引物，其中正向和反向引物中公用接头彼此反向互补； 所述正向和反向引物的公用接头为GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目标基因组区域选自BRCA1和BRCA2的70 个外显子；

2)利用步骤1)中所述正向和反向引物，通过第一轮多核苷酸 扩增反应，扩增目标基因组区域，得到在所述目标基因组区域5’端 和3’端加入公用接头GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的 可连接性DNA片段；

3)步骤2)获得的可连接性DNA片段，作为第二轮多核苷酸扩 增反应的模板进行边扩增边连接反应；得到由步骤2)所得可连接性 DNA片段连接而成的长链DNA。

2.一种针对两个及两个以上的多个目标基因组区域进行边扩增 边连接的方法，包括步骤：

1)针对多个目标基因组区域的每个区域，分别设计包含公用接 头GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸扩增反 应的正向和反向引物，其中每对正向和反向引物中公用接头彼此反向 互补；所述正向和反向引物的公用接头为GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目标基因组区域选自BRCA1和BRCA2的70 个外显子；

2)利用步骤1)中所述正向和反向引物，通过第一轮多核苷酸 扩增反应，分别扩增目标基因组区域，得到在各个目标基因组区域5’ 端和3’端加入公用接头GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC 的不同可连接性DNA片段；

3)将步骤2)获得的不同可连接性DNA片段进行等量地混合，作 为第二轮多核苷酸扩增反应的模板进行边扩增边连接反应；得到由步 骤2)所得不同的可连接性DNA片段按随机连接顺序连接而成的长链 DNA。

3.一种建立针对一个目标基因组区域序列重测序随机DNA文库 的方法，包括步骤：

1)针对一个目标基因组区域，设计包含公用接头 GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸扩增反应 的正向和反向引物，其中正向和反向引物中公用接头彼此反向互补；

所述正向和反向引物的公用接头为GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目标基因组区域选自BRCA1和BRCA2的70 个外显子；

2)利用步骤1)中所述正向和反向引物，通过第一轮多核苷酸 扩增反应，扩增目标基因组区域，得到在所述目标基因组区域5’端 和3’端加入公用接头GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的 可连接性DNA片段；

3)步骤2)获得的可连接性DNA片段作为第二轮多核苷酸扩增 反应的模板进行扩增反应；得到由步骤2)所得可连接性DNA片段连 接而成的长链DNA；

4)将步骤3)所得的长链DNA用DNA随机打断法打断，得到随 机DNA文库。