[发明专利]鉴别鲤鱼东亚类群与欧洲类群的引物、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及鲤鱼两种类群的鉴别方法，具体地，涉及分布于我国的东亚类群鲤鱼和分布于欧洲大陆的欧洲类群鲤鱼的简易、快速的分子鉴别技术和方法，属于遗传学领域

背景技术

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)自然分布于东亚和欧洲大陆，是目前世界上养殖范围最广泛、历史最悠久的淡水鱼类。在长期的自然选择和人工驯养过程中，鲤已形成了数量众多的品系或群体。综观鲤鱼的遗传亲缘关系和系统分类，这些数量众多的鲤鱼品系或群体分为两大类群：东亚类群和欧洲类群。关于这两大类群的起源问题，一直存在较大争议。如国外学者：Kohlmann等在2003年《Aquatic Living Resources》16卷421-431和2005年《Aquaculture》247卷253-266报道了东亚鲤鱼起源于东亚，而欧洲鲤鱼起源于欧洲；而许多作者研究表明，欧洲鲤鱼起源于欧洲很难得到支持，而认为欧洲鲤鱼是东亚鲤鱼扩散而来，如Froute等2002年《Journal ofFish Biology》61卷301-304，Thai等2004年《Animal Genetics》36卷23-28，Mabuchi等2005年《Journal of FishBiology》66卷1516-1528和2006年《Aquaculture》257卷68-77。国内学者周建峰等于2003年《科学通报》48卷第2期167-170报道中国长江野鲤与俄罗斯散鳞镜鲤属于东亚类群，而伏尔加野鲤与德国镜鲤属于欧洲类群。可见，要弄清鲤鱼中这两大类群的起源问题，首先得对这两种鲤鱼类群实施有效鉴别。

我国是东亚鲤鱼群体最为丰富的国家，是鲤鱼东亚类群的最主要分布区。本发明人近几年在对中国各主要水系鲤鱼的遗传分析中发现，在长江野鲤中16.36％个体、黄河野鲤中27.59％个体、新疆额尔齐斯河鲤鱼31.25％个体、黑龙江野鲤中40.35％个体与欧洲鲤鱼类群具有相同的鉴别性的线粒体DNA序列变异位点。此发现表明，在我国的鲤鱼群体中，也具有欧洲类群的少部分鲤鱼。如何在我国鲤中有效快速地鉴别出东亚类群与欧洲类群，这不仅在学术上，而且在种质资源保护与利用上均具有十分重要的意义和价值。

除我国具有数量众多的土著鲤鱼群体或品系外，还从欧洲引进了鲤鱼群体。黑龙江水产研究所1958年从前苏联引进了散鳞镜鲤(品种登记号：GS-03-010-1996)；黑龙江水产研究所1984年从德国引进了德国镜鲤，并开展了系统选育工作，成为一个优良养殖品种(品种登记号：GS-01-007-1996)在全国一些省、区养殖；全国水产技术推广总站1998年从俄罗斯引进了乌克兰鳞鲤(品种登记号：GS-03-001-2005)。这些具有不同来源和遗传背景的鲤鱼类群在我国的广泛养殖，需发展相应的遗传鉴别技术予以甑别，有利于对这些鲤鱼品种的保护。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快速地鉴别鲤的东亚类群与欧洲类群的引物、试剂盒及方法，本发明是通过设计一对特异性的PCR引物，扩增它们基因组DNA，检测有无PCR扩增产物而实现。

本发明提供的技术方案是：一种鉴别鲤鱼东亚类群与欧洲类群的引物，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所述，即5′-GACTATGAAAATCTAGGATTC-3′，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所述，即5′-CATGGTCAGTCTCAGGATTCA-3′。

一种鉴别鲤鱼东亚类群与欧洲类群的试剂盒，包含上述的引物。

上述的试剂盒，还包含10mmol/L Tris-HCL，50mmol/L KCL，30mmol/L MgCL₂，0.01％明胶，0.1mmol/L dNTP混合液，2IU Taq酶和蒸馏水，所述的引物浓度为0.2μmol/L。

一种利用上述的试剂盒鉴别鲤鱼东亚类群与欧洲类群的方法，包括下列步骤：

(1)提取待鉴定的鲤鱼的基因组DNA。

(2)以提取的基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，有扩增条带的为鲤鱼的东亚类群，无扩增条带的为鲤鱼的欧洲类群。

上述的方法中，所述待鉴定的鲤鱼是怀疑东亚类群还是欧洲类群的鲤鱼。

本发明具有如下优点：可简便、快速、有效、准确地鉴别鲤鱼的东亚类群和欧洲类型，从而为欧亚大陆鲤鱼的遗传甑别、种质保护和资源利用提供一项技术手段，具有重大科学意义和实用价值。

附图说明