[发明专利]EGFR基因突变的快速检测

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，具体涉及一种与肿瘤用药选择和诊断相关的EGFR基因突变的快速检测。

背景技术

EGFR是原癌基因c-erbB1的表达产物，是表皮生长因子受体家族(HER)中的4个成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用，该家族包括HER1(erbB1，EGFR)、HER2(erbB2，NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。其分子量为170k D的跨膜糖蛋白，由胞外区、跨膜区及胞内区3部分组成。其氮末端胞外区又可分成4个亚区，是EGFR与配体(转化生长因子-α、表皮生长因子、双调节素等)结合的部位；跨膜区由一个亲脂性多肽螺旋构成；胞内区含有保守的酪氨酸激酶磷酸化位点。EGFR在非活性状态下是单体，当受体与配体结合后可形成同源或异源二聚体，受体胞内区发生自我磷酸化并启始一系列胞内信号级联。与之相关的信号途径和信号传递蛋白有：磷酯酶C-γ1、磷酯酰肌醇3激酶、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶等。最终激活相关核蛋白，促进细胞从G期过渡到S期。EGFR对细胞衍生起重要作用，相关研究证明，EGFR在癌症发展过程中如血管生成及肿瘤细胞转移、粘附和凋亡抑制等过程中起重要作用。转化生长因子-α和EGFR在实体瘤中过表达，往往标志着病情进一步发展和不良预后(Yarden Y.Nat Rev Mol Ce U Biol，2001，2(2)127-137)。

EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。

EGFR存在于大多数细胞中，在多种肿瘤中都有表达，如结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌和非小细胞肺癌等，其中在结直肠癌的阳性表达率为25％～77％(Mendelsohn J，.J Clin Oncol，2003，21(14)：2787-99)，在胃癌的阳性表达率为38％～51.5％.这种异常表达与肿瘤细胞的增殖、新生血管形成、侵袭、转移及抗凋亡等有关，过度表达的EGFR常常预示着无病生存期和总生存期下降、复发及远处转移的风险增加(Opdwyer PJ，Semin Oncol，2002，29)。同时表达EGFR及其配体TGF-α的胃癌预后差，5年生存率只有12％，而EGFR及TGF-α表达水平正常或者只有某一过度表达的胃癌，5年生存率则有45％和36％(Shah MA，.Proc Am Soc Clin Oncol，2005，24：abstr 4025)。Radinsky等检测了大肠癌手术后标本的EGFR表达情况，发现晚期大肠癌(Dukes’D期、肝转移)的EGFR mRNA的水平是早期病变的10～20倍。约40％～80％的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer.NSCLC)上调表达表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)，EGFR信号系统参与肿瘤侵袭、血管生成、凋亡障碍和化放疗抗拒，是NSCLC治疗重要靶点之一。吉非替尼是EGFR酪氨酸激酶(TK)的抑制剂，II期临床试验表明，对部分NSCLC具有较好的疗效，二线治疗的缓解率为10％～19％。癌组织中EGFR的表达水平与吉非替尼疗效无关。研究报道，吉非替尼的疗效与EGFR受体基因第18、19、20和21外显子突变有关，对吉非替尼反应患者多伴有EGFR基因的突变。因此，建立快速检测NSCLC瘤组织EGFR基因突变的方法，有助于筛选患者进行治疗。