[发明专利]一种含有抗真菌脂肽的皮肤擦剂及其制备方法

权利要求书

1.一种抗真菌脂肽微生物发酵菌株，其分类属枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BI1，保藏号为CGMCC No.3412。

2.一种采用权利要求1所述菌株制备的抗真菌脂肽提取物，其特征在于：

(1)采用的发酵菌株为CGMCC No.3412，发酵培养基组成为(g/L)：糖质原料5～50g，氮源2～20g，柠檬酸钠1～3g，MgSO₄·7H₂O0.1～0.2g，K₂HPO₄2～6g，KH₂PO₄3～9g，pH 7.0～7.2；

(2)发酵培养：按1％-10％(v/v)的接种量将培养好的种子接入发酵培养基，培养温度30～40℃，发酵通气量为5～13m³/h，罐压0.02～0.09MPa，搅拌速度100-150转/分钟，发酵时间30～60小时，发酵过程中通入无菌空气，用氨水或液碱维持发酵液pH在6.5～7.5，发酵液中抗真菌脂肽产量为1～2g/L。发酵液4℃，10000r/min离心20min去菌体，得到的除菌发酵液用6mol/L的HCl调pH至2.0，4℃静置过夜；次日，4℃，10000r/min离心，20min得到沉淀，处理后得到抗真菌脂肽提取物。

3.权利要求2所述的提取物，其中糖质原料包括：葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、可溶性淀粉糖化液、玉米粉糖化液或麸皮糖化液。

4.权利要求2所述的提取物，其中氮源原料包括：硫酸铵、硝酸铵、硝酸钠、蛋白胨、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母粉、牛肉膏或大豆粉。

5.权利要求2所述抗真菌脂肽提取物在制备治疗皮肤癣病药物方面的应用。

6.一种用于治疗皮肤癣病的皮肤擦剂，该皮肤擦剂由权利要求2所述的抗真菌脂肽提取物以及药学上可接受的载体组成。

7.权利要求6所述的皮肤擦剂，为外用皮肤擦剂包括软膏剂、涂膜剂或酊剂。

8.权利要求7所述的皮肤擦剂，其中软膏剂、涂膜剂或酊剂分别由下列成分组成：

(1)涂膜剂由下列成分组成：

抗真菌脂肽提取物50～150mg；药用乙醇5-15mL；羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶浆70～90mL；药用甘油5～15mL；其中的药用乙醇为无水乙醇；

(2)软膏剂由下列成分组成：

单甘酯50～150g，硬脂酸50～150g，十八醇50～150g，液状石蜡50～70mL，丙三醇40～60mL，三乙醇胺6～10g，抗真菌脂肽0.5～1.5g，羟苯乙酯0.5～1.5g，蒸馏水400～650mL；

(3)酊剂由下列成分组成：

抗真菌脂肽提取物500mg，无水乙醇100mL，药用甘油25～35mL，氮酮1～2mL，蒸馏水20～45mL。

9.权利要求8所述涂膜剂的制备方法，其特征在于：将抗真菌脂肽1g溶于100mL药用乙醇中，取该乙醇溶液5～15mL，加入到70～90mL羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶浆中，搅拌均匀，再加入药用甘油5～15mL，搅拌均匀即可；其中羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶浆的制备：在容器中加入100～200mL无菌蒸馏水，然后加入1～2g羧甲基纤维素钠和2～4g海藻酸钠，搅拌，加热至60℃～80℃，在转速为60～120rpm的条件下搅拌至羧甲基纤维素钠和海藻酸钠完全溶解，最后冷却至室温，得到羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶浆。

10.权利要求2所述抗真菌脂肽提取物含量的测定方法，其特征在于：将1克抗真菌脂肽提取物溶于100mL无水乙醇中，10000r/min离心20min，弃去沉淀，上清液用0.45μm的滤膜过滤除去杂质，用4.6mm×250mm Hydrosphere C18分析柱检测；其中流动相A为：含有0.05％三氟乙酸的乙腈，流动相B为：含有0.05％TFA的水溶液；流速0.5mL/min；检测波长265nm，每次进量为10μL，测定抗真菌脂肽提取物中真菌脂肽的含量；其中流动相比例A∶B的体积比＝45∶55。