[发明专利]续断药材质量控制的检测鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种续断药材质量控制的检测鉴定方法，属于天然药物的质量控制领域，具体为指纹图谱领域，涉及续断药材的HPLC指纹图谱的鉴定方法。其可作为续断药材质量控制的指标之一。

背景技术

续断为川续断科川续断属植物川续断(Dipsacus asperoides C.Y.Cheng etT.M.Ai)的干燥根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏等功效，可用于腰膝酸软、风湿痹痛、跌扑损伤等。续断含有三萜皂苷类、环烯醚萜类、生物碱类、挥发油类及甾醇类等成分，其中三萜皂苷类是续断的主要活性成分，具有抗骨质疏松、促进骨折愈合的作用。目前关于续断药材的化学成分质量控制研究多为采用高效液相色谱法测定川续断皂苷VI含量，或采用比色法测定总皂苷的含量，对于多成分的全面检测研究尚不多，代表的有：胥秀英等(中国药业2008年第17卷第5期)研究了续断指纹图谱模糊模式识别，虽然分析时间较短为50分钟，但续断成分信息量较少，只有8个主要色谱峰；刘凤乐等(中医药学报2009年第37卷第5期)用HPLC指纹图谱控制续断质量，色谱反映的化学成分信息增多，为18个主要成分，但分析时间过长，1个样品分析需近2小时；而王秀军等(安徽农业科学2009年第37卷第26期)和杨明利等(武汉生物工程学字学报2009年第5卷第3期)续断指纹图谱研究仅给出2个特征成分峰。上述所有研究中只有1个成分峰川续断皂苷VI可以用对照品确认外，其它大量成分峰的鉴定尚属空白。现有质量研究尚未能全面、有效表征续断化学成分的特征，难以有效控制续断质量。但是具体采用哪些成分峰能够准确而真实地确定续断化学成分的特征，成为本领域尚未解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种续断药材的检测鉴定方法及其质量控制方法，以建立一种能够更全面、更有效检测续断化学成分的指纹图谱。为了用尽可能短的时间表征更丰富的续断化学成分信息，本申请通过采用高效液相色谱在205nm检测续断化学成分建立续断指纹图谱，在80分钟完成检测，有24个主要色谱峰，进一步用二极管阵列检测技术，初步分析了续断化学成分的紫外吸收特征及其化合物类型，判断24个主要成分色谱峰中有13个是皂苷类化合物，再进一步通过液相色谱与电喷雾质谱联用技术首次分析了续断化学成分的质谱特征，鉴定了33个化合物的分子量，通过与对照品或文献对照对其中10个成分进行了确认、推测。从而实现更有效、全面的控制续断药材质量。

本发明的检测方法所得到的指纹图谱可以用于续断药材的质量控制。

本发明是这样实现的：

一种续断药材的检测鉴定方法，使用高效液相色谱仪，DAD检测器，高效液相色谱与电喷雾质谱联用仪，色谱工作站，续断药材供试品溶液，其特征在于，各步骤中采用如下色谱条件：

色谱柱：碳十八烷基键合硅胶填料色谱柱和预柱；

柱温：25～35℃；

流动相：A为体积百分比0.05～0.5％的磷酸水溶液(液相色谱与质谱联用时磷酸水溶液改为甲酸水溶液)；B为乙腈；A+B＝100％，采用梯度洗脱：0～20min，8～16％B，20～30min，16～19％B，30～40min，19～29％B，40～45min，29％B，45～50min，29～48％B，50～60min，48％B，60～70min，48～85％B，70～75min，85～100％B，75～80min，100％B；

流速：1ml/min；

检测波长205nm；

所述供试品溶液的制备方法是：取续断细粉0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积百分比50％～100％甲醇10～50mL，超声处理30min，放冷，用体积百分比50％～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm滤膜。

本发明推荐以下优化方案：

所述的柱温是25℃。

所述的磷酸水溶液的体积百分浓度为0.1％；

所述供试品溶液的制备方法中，所述加入甲醇的体积百分比是70％、25mL；补充甲醇的体积百分比是70％甲醇补足减失的重量。

所述液相色谱仪进样量为10μl；记录时间在80分钟。

本申请采用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术，在205nm检测续断化学成分建立续断色谱指纹图谱，通过二极管阵列检测(DAD)技术分析续断化合物的类型，进一步通过液相色谱与电喷雾质谱联用技术首次分析了续断化学成分的质谱特征，通过与对照品或文献对照对续断成分进行确认、推测。本研究有效弥补了现有续断质量控制的不足，为续断药材的深入质量控制奠定坚实基础。