[发明专利]一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制备方法和用于实施该方法的试剂盒

权利要求书

1.一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制备方法，包括铺片步骤、细胞裂解步骤、解旋电泳步骤、中和步骤以及染色步骤，其特征在于，所述铺片步骤包括：

第一铺胶步骤：在一个预处理的载玻片上铺一个第一琼脂糖凝胶层；

加缓冲液步骤：在所述第一琼脂糖凝胶层上加Honda buffer缓冲液；

点样步骤：将一个蚕豆根尖的切面反复多次进入所述Honda buffer缓冲液液面；

第二铺胶步骤：在所述Honda buffer缓冲液上铺一层琼脂糖胶体液，盖上盖玻片，固化后形成一个细胞胶体混合凝胶层。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铺片步骤进一步包括：

第三铺胶步骤：移走所述盖玻片，在所述细胞胶体混合凝胶层上铺一个第二琼脂糖凝胶层。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一铺胶步骤中，所述琼脂糖胶体液为0.5％正常熔点琼脂糖胶体液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Honda buffer缓冲液包括0.44M的sucrose、体积分数为2.5％的Ficoll(type 400)，体积分数为5％的DextranT-40、25mM且pH为8.5的Tris-HCl、10mM的MgCl₂、10mM的β-mercaptoethanol、以及体积分数为2.5％的Triton X-100。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加缓冲液步骤中，所述Hondabuffer缓冲液的剂量为10μl。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述点样步骤中，所述蚕豆根尖为被切去远端根尖后所剩的近端根尖。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二铺胶步骤中，所述琼脂糖胶体液为0.5％低熔点琼脂糖胶体液。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第三铺胶步骤包括在所述细胞胶体混合凝胶层上加剂量为80μl的、0.5％低熔点的琼脂糖胶体液，盖上新盖玻片，放置在4℃环境下10分钟。

9.根据权利要求1至10中任意一项所述的方法，其特征在于，所述细胞裂解步骤包括将经过所述铺片步骤处理的载玻片放在染色缸中，加100ml裂解液，放置在4℃环境下2小时，其中，所述裂解液包括2.5M的NaCl、100mM的Na₂EDTA、10mM的Tris base、以及体积分数1％的Triton X-100，pH 10。

10.一种用于实施根据权利要求1至10中任意一项所述的方法的试剂盒，其特征在于：包括第一至第六试剂、载玻片以及盖玻片，所述第一试剂是0.5％正常熔点琼脂糖胶体液，所述第二试剂是由0.44M的sucrose、体积分数为2.5％的Ficoll(type 400)，体积分数为5％的Dextran T-40、25mM且pH为8.5的Tris-HCl、10mM的MgCl₂、10mM的β-mercaptoethanol、以及体积分数为2.5％的TritonX-100构成的Honda buffer缓冲液，所述第三试剂是0.5％低熔点琼脂糖胶体液，所述第四试剂是由2.5M的NaCl、100mM的Na₂EDTA、10mM的Tris base和1％Triton的X-100构成的裂解液，第五试剂是由0.3M的NaOH和1mM的Na₂EDTA构成的且pH＞13的碱性电泳缓冲液，第六试剂是由0.4M、pH 7.5的Tris-HCl构成的中和缓冲液。