[发明专利]戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，属于生物技 术领域。

背景技术

戊型肝炎过去称为肠道传播的非甲非乙型肝炎。戊型肝炎病毒(HEV)主要 侵犯肝脏，在肝细胞中复制，本病毒通过对肝细胞的直接损伤和免疫病理作用， 引起肝细胞的炎症或坏死，临床上表现为急性病毒性肝炎。戊型肝炎病毒主要 经粪—口途径传播。人感染戊型肝炎病毒后，可表现为临床型和亚临床型感染。 该两类病人均可随粪便排出戊型肝炎病毒，从而污染水源、食物和周围环境而 发生传播。戊型肝炎病毒的检测可作为切断戊型肝炎传播途径为主的综合性预 防措施，防止疾病在人群中传播。

目前戊型肝炎病毒检测方法主要有免疫电子显微镜，免疫荧光法，酶联免 疫吸附试剂，蛋白吸印试验，逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)。

HEV感染的实验室诊断方法主要有血清学检查及分子生物学技术，常用的方 法有补体结合试验和酶联免疫法等，补体结合试验参与反应的成分多，影响因 素复杂，操作步骤复杂并且要求十分严格，容易出现错误；酶联免疫法操作繁 琐、重复性差、所需时间长、价格昂贵，需专门人员操作实验，在一定程度上 限制了其应用。

发明内容

本发明要解决的问题是针对现有技术的不足，提供一种适用于临床辅助诊 断和鉴别的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒具有结构简 单、使用便捷、检测速度快的优点。

为解决以上问题，本发明的技术方案如下：戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒， 其特征在于：所述试剂盒包括：

检测盒，包括检测盒盒体和盒盖，盒盖的内侧设有硝酸纤维素膜，与硝酸 纤维素膜位置对应的盒盖上设有反应孔，检测盒盒体内设有吸水垫，硝酸纤维 素膜上设有有检测点和质控点；

金标工作液瓶，盛有金标工作液，该金标工作液由金标浓缩液与稀释液混 合而成；和

洗涤液瓶，盛有洗涤液，该洗涤液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血 清白蛋白和盐酸；

其中，检测点包被有HEV抗原，质控点包被有羊抗鼠抗体。

作为上述技术方案的进一步改进：

所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶15-30。

所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶20。

所述制备方法包括检测盒、金标工作液和洗涤液的制备；

其中，金标工作液的制备包括以下步骤：

a、制备金标浓缩液

取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5-1％柠檬酸三钠溶液 0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续 煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温；

向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合 溶液；

然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用；

b、制备稀释液

将121.1-363.3mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.5-2.0mg的 牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入 双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保 存，备用；

c、将稀释液与金标浓缩液按比例混合，得到金标工作液，并放置在金标工 作液瓶内。

所述洗涤液的制备包括以下步骤：

将121.1-242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.1-1mg的牛 血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双 蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内， 置于2～8℃下保存。

所述检测盒的制备包括以下步骤：

首先在硝酸纤维素膜的检测点包被HEV抗原，在质控点包被羊抗鼠抗体；

然后将盒盖、硝酸纤维素膜、吸水垫和检测盒盒体按照从上而下的顺序组 装并扣紧，组装成检测盒；

将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时；

最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋内并封口。

步骤b中，三羟甲基氨基甲烷的用量为242.2mg，氯化钠的用量为0.9mg， 牛血清白蛋白的用量为1mg。