[发明专利]组织培养铁皮石斛类原球茎的方法

权利要求书

1.一种组织培养铁皮石斛类原球茎的方法，它包括如下步骤：

a、植物体的选择及无菌处理：

选择6～8月份生长的铁皮石斛野生新鲜植株，除去根和叶进行清洗和无菌处理，选取实生苗的幼茎，将幼茎剪成0.3～0.5cm²大小铁皮石斛组织；

b、组织诱导培养：

将经过无菌处理后的铁皮石斛组织在诱导培养基中进行组织诱导培养，培养周期：10～24天，培养温度：10～30℃，光照时间：1～24小时/天，光照强度：0～100μmol/m²·s；所述的诱导培养基为：MS培养基+蔗糖0～50g/L+琼脂0～10g/L+α-萘乙酸0.1～5.0mg/L+6-苄氨基嘌呤0.1～5.0mg/L，pH值为5.0～7.0；

c、大规模培养：

将诱导出的铁皮石斛类原球茎在培养基中进行大规模培养，培养周期：10～24天，培养温度：10～30℃，光照时间：0～24小时/天，光照强度：0～100μmol/m²·s；所述的大规模培养基为：MS培养基+蔗糖20～50g/L+α-萘乙酸0.1～5.0mg/L+6-苄氨基嘌呤0.1～5.0mg/L，pH值为5.0～7.0。

2.按照权利要求1所述的组织培养铁皮石斛类原球茎的方法，其特征在于：所述的丛生芽诱导培养：培养周期：15～20天，培养温度：20～25℃，光照时间：8～20小时/天，光照强度：50～80μmol/m²·s；所述的诱导培养基为：MS培养基+蔗糖20～30g/L+琼脂4～6g/L+α-萘乙酸2.0～3.0mg/L+6-苄氨基嘌呤2.0～3.0mg/L，pH值为5.5～6.5；所述的大规模培养：培养周期：15～20天，培养温度：20～25℃，光照时间：8～20小时/天，光照强度：50～80μmol/m²·s；所述的大规模培养基为：MS培养基+蔗糖30～40g/L+α-萘乙酸2.0～3.0mg/L+6-苄氨基嘌呤2.0～3.0mg/L，pH值为5.5～6.5。

3.按照权利要求1或2所述的组织培养铁皮石斛类原球茎的方法，其特征在于植物体的的无菌处理方法包括如下步骤：

a)将选取的铁皮石斛健康实生苗的幼茎，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，置超净工作台内；

b)将铁皮石斛幼茎用70～80％的酒精浸泡20～40秒进行表面灭菌，再用无菌水清洗干净；

c)将经过酒精灭菌的铁皮石斛幼茎用0.05～0.15％氯化汞溶液浸泡消毒3～6分钟，用无菌水冲洗4～5次，再用滤纸吸干无菌水；

d)无菌条件下将氯化汞消毒的铁皮石斛幼茎剪成0.3～0.5cm²大小铁皮石斛组织，接种于诱导培养基中，每瓶接种5块。