[发明专利]制备多能干细胞的材料和方法

权利要求书

1.获得诱导多能干细胞的方法包括以羊膜细胞为滋养层，培养体细胞足够长一段时间后，使体细胞重编程为多能干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述羊膜细胞为羊膜上皮细胞、胚胎外间充质细胞或羊水细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述羊膜上皮细胞为哺乳动物羊膜上皮细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述哺乳动物羊膜上皮细胞来源于灵长类，猪，狗，马，牛，羊，兔，和啮齿类等。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述羊膜上皮细胞是人羊膜上皮细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述羊膜上皮细胞培养不超过6代(P0-P5)。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述羊膜上皮细胞为新鲜分离的P0羊膜上皮细胞。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞是成熟的体细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞是来源于胚胎阶段的体细胞。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞包括成人皮肤成纤维细胞（ADSF），人胚胎成纤维细胞（HEF），小鼠成纤维细胞（MF），小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)，猪成纤维细胞(PF)，猪胚胎成纤维细胞(PEF)等。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞培养采用KO-DMEM培养基。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述KO-DMEM培养基包含β-FGF（碱性成纤维细胞生长因子）,人脐带血清或小牛血清，胎牛血清和LIF(白血病抑制因子)。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述KO-DMEM培养基包含10ng/ml β-FGF,5%人脐带血清,和12ng/ml LIF。

14.根据权利要求1-13所述的方法获取诱导性多能干细胞。

15.权利要求14的多能干细胞可分化为各种体细胞或生殖细胞，形成组织和器官。

16.干细胞治疗方法包括：

（1）采集治疗对象（人或动物）的体细胞。

（2）根据权利要求1-13，将体细胞重新编程为多能干细胞；

（3）多能性干细胞的诱导分化。

17.根据权利要求16所述的方法，多能性干细胞的诱导分化发生在体内。

18.根据权利要求16所述的方法，多能性干细胞的诱导分化发生在体外。

19.权利要求18所述的方法进一步包括将分化的细胞移植到治疗对象。

20.根据权利要求16所述的方法，所述干细胞治疗可用于再生医学、组织工程治疗或动物育种。