[发明专利]截短CD20蛋白质，DeltaCD20

说明书

技术领域

本发明特别涉及一种源于编码CD20的基因的选择性剪接的蛋白质、编码如本发明所述蛋白质的核酸、CD20基因的突变形式，以及使用如本发明所述的蛋白质和核酸序列的药物、诊断工具、诊断方法和治疗方法。

背景技术

编码在B淋巴细胞上表达的CD20蛋白质的基因属于定位于11号染色体q12区域的家族。此区域确定了命名为MS4A(跨膜结构域4亚家族(Membrane Spanning 4 domain Subfamily A))的基因簇，具有称为MS4A1到MS4A12的12个亚类。此基因簇有600kb。整个CD20基因有41.17kb，分散为被7个内含子隔开的8个外显子。

CD20的前体mRNA具有14.95KB大小，有416bp的不翻译的5’序列(5’UTR)。3’UTR区域具有跟随polyA延伸的2291bp，似乎与调控序列对应。该序列潜在地编码具有297个氨基酸(AA)的蛋白质，预测分子量为33.0KDa。在5’UTR区域中，更具体地在外显子1中，各种剪接位点已经被识别，产生大小变化为2.8、2.6和3.4kb的三种形式的转录物。

各种转录物形式编码具有33KD分子量的CD20蛋白质；尽管如此，通过蛋白质印记(Western blot)和免疫沉淀，已证明33、34.5和36KD三种异形体的存在，与剪接的变异体不对应但与转录后修饰，磷酸化对应。此蛋白质由极疏水区、4个跨膜片段(AA68至84)组成，确定细胞外区域(被外显子VI编码的AA)和细胞内区域(被外显子III、V、VII和VIII编码的AA)。

虽然被广泛用作外周血B淋巴细胞的标记，用于淋巴细胞群鉴定技术或用于疾病或B血液病(B haemopathy)的诊断，CD20蛋白质的功能至今未被阐明。尽管如此，人类或小鼠的CD20分子的蛋白质结构类似于其它蛋白质，诸如视紫质、间隙连接蛋白或某些肾上腺素受体，全部涉及信号传导，暗示该蛋白质的类似作用。此蛋白质的细胞内部分包含许多磷酸化的序列并且与Src家族酪氨酸激酶(Fyn，Lyn，Lck)关联。

关于CD20的体外和敲除(KO)小鼠模型功能研究已显示该蛋白质参与膜间Ca++转运。随着酪氨酸激酶激活引起B细胞粘附，抗CD20抗体与此分子的结合也诱导c-Myc和B-Myb癌基因的增加，细胞内蛋白质磷酸化的增加，CD18、CD58和II类MHC分子的增加。这些功能归功于CD20蛋白质仍存争议，因为在关于CD20的KO小鼠模型中，B细胞的发育和功能未被报导为正常，并且没展现出特殊的表现异常。

进一步的功能被归功于CD20蛋白质，即在B淋巴细胞(BL)分化和其激活/成熟为浆细胞的中的细胞周期调控。在B淋巴细胞个体发育中，在编码Ig重链的基因重排之后，伴随持续的膜表达至成熟晚期B阶段，CD20在前B细胞表面(祖B细胞上不存在)被大量地表达。CD20在造血干细胞上、在祖B细胞和浆细胞上不表达，除了在某些病理情况中，在可能与浆母细胞有关的一小团细胞上。最后，注意CD20配体未知，致使其功能的确定困难。

在B淋巴细胞表面的表达使通过流式细胞术或采用免疫磁纯化技术鉴定此群体成为可能。CD20分子在大多数B细胞上的表达参与到恶性疾病，由于一些原因使其成为治疗靶点的选择：

——标记存在于BL上并且在干细胞和浆细胞上不存在

——它在细胞表面被大量地表达

——它在蛋白水解之后不被分泌或释放进循环

——在抗CD20固定之后，CD20/Ab复合体不被内化

利妥昔单抗(Rx，商品名：Mabthera^TM)是针对CD20抗原的人化小鼠嵌合抗体。它对提呈CD20抗原的恶性细胞是有活性的，即在III-IV阶段的滤泡性淋巴瘤和侵袭性扩散大B细胞非霍奇金淋巴瘤，CD20阳性。它也被使用，选择地与化疗结合，并且更多的是实验性地在其他情况下，举例如某些自身免疫病，诸如狼疮或类风湿性关节炎。

已按其固定补体和诱导ADCC(抗体依赖细胞介导的(Antibody-Dependent Cell-Mediated))细胞毒性作用的能力选择人类IgH的Fc部分。影响其功效的因素是多种多样的：CD20表面表达密度，抗体扩散，治疗性抗CD20抗体捕获，抗体/靶点结合，FcgR3受体多态性。

发明内容