[发明专利]具有抗微生物活性的多肽

说明书

序列表

本发明包含序列表。

技术领域

本发明涉及具有抗微生物活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽的方法。

背景技术

本发明的目标是提供具有改善的抗微生物活性的多肽。所述多肽可呈现减少的溶血活性和/或减少的细胞毒性。所述多肽还可呈现对阳离子如Ca²⁺、Mg²⁺、Na⁺的减少的敏感性。所述多肽还可与其他抗微生物多肽相比呈现不同的和有利的抗微生物谱。

发明内容

本发明涉及具有抗微生物活性的分离的多肽，选自下组：

(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸1至40的多肽；

(b)(a)具有抗微生物活性的片段。

本发明还涉及编码本发明多肽的多核苷酸，并涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体和重组宿主细胞。

本发明还涉及产生此类具有抗微生物活性的多肽的方法，包括(a)在有助于产生所述多肽的条件下，培养包含核酸构建体的重组宿主细胞，所述核酸构建体包含编码所述多肽的多核苷酸；和(b)回收所述多肽。

本发明还涉及使用本发明的多肽和多核苷酸的方法。

定义

抗微生物活性：术语“抗微生物活性”于本文定义为一种能够杀死微生物细胞或抑制微生物细胞生长的活性。在本发明的上下文中，术语“抗微生物的”系意欲意指有杀细菌的和/或抑制细菌的和/或杀真菌的和/或抑制真菌的效果和/或杀病毒的效果，其中术语“杀细菌的”应被理解为能够杀死细菌细胞。术语“抑制细菌的”应被理解为能够抑制细菌的生长，即抑制生长的细菌细胞。术语“杀真菌的”应被理解为能够杀死真菌细胞。术语“抑制真菌的”应被理解为能够抑制真菌生长，即抑制生长的真菌细胞。术语“杀病毒的”应被理解为能够使病毒失活。术语“微生物细胞”代表细菌或真菌细胞(包括酵母)。

在本发明的上下文中，术语“抑制微生物细胞的生长”意欲指细胞处于非生长状态，即它们不能繁殖。

在一个优选的实施方案中，术语“抗微生物活性”系定义为杀细菌的和/或抑制细菌的活性。更优选地，“抗微生物活性”定义为针对葡萄球菌属(Staphylococci)(优选金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))的杀细菌的和/或抑制细菌的活性。

就本发明而言，抗微生物活性可根据由Lehrer等，Journal ofImmunologicalmethods，Vol.137(2)pp.167-174(1991)所述的方法测定。或者，抗微生物活性可根据来自CLSI(临床和实验室标准学会(Clinical and Laboratory StandardsInstitute)；之前称为国家临床与实验室标准委员会(Naional Committee ofClinical and Laboratory Standards))的NCCL S指南测定。

具有抗微生物活性的多肽以浓度为500μg/ml；优选浓度为250μg/ml；更优选浓度为100μg/ml；甚至更优选浓度为50μg/ml；最优选浓度为25μg/ml；且特别是浓度为10μg/ml的具有抗微生物活性的多肽在相关微生物生长底物中于37℃温育16小时后(优选8小时后，更优选4小时后，最优选2小时后)可将金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)的活细胞数目减少至1/100。

具有抗微生物活性的多肽当以500μg/ml的浓度加入；优选当以250μg/ml的浓度加入；更优选当以100μg/ml的浓度加入；甚至更优选当以50μg/ml的浓度加入；最优选当以10μg/ml的浓度加入；以及特别是当以5μg/ml的浓度加入时，在相关微生物生长底物中于37℃也可将金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)的长出(outgrowth)抑制8小时。

本发明的多肽具有至少20％，优选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，且甚至最优选至少100％的由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQID NO：3或SEQ ID NO：4的氨基酸1至40所示的氨基酸序列组成的多肽的抗微生物活性。