[发明专利]具有改善的底物特异性的PQQ-依赖性葡萄糖脱氢酶的新变体

权利要求书

1.可溶性吡咯并喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶(sPQQGDH)，其特征在于，与不动杆菌属的一种野生型菌株诸如，例如，醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) LMD 79.41的sPQQGDH相比，其在底物结合区域的范围内具有3-5个氨基酸的插入。

2.如权利要求1所述的sPQQGDH，其特征在于，插入位点距离底物结合区域不超过5埃。

3.如权利要求1或2所述的sPQQGDH，其特征在于，基于野生型醋酸钙不动杆菌LMD 79.41的序列，插入位点在位置Q168和L169之间。

4.如权利要求1-3中任一项所述的sPQQGDH，其特征在于，其通过诱变由PT16、KOZ62、KOZ65、PTN69、KG106、PTN26、PT15、KGN80、KG140、KGN34、KGN25、KGN100系列的菌株产生。

5.如权利要求1-4中任一项所述的sPQQGDH，其具有3个氨基酸的插入，其中插入的氨基酸在位置1具有A或G，在位置2具有Y、F或W，和在位置3具有Q、L、V或I。

6.如权利要求1-4中任一项所述的sPQQGDH，其具有4个氨基酸的插入，其中插入的氨基酸在位置1具有A或G，在位置2具有G、D或L，在位置3具有R或A，和在位置4具有M或V。

7.如权利要求1-4中任一项所述的sPQQGDH，其具有5个氨基酸的插入，其中插入的氨基酸在位置1具有A、M、S或V，在位置2具有E、G或S，在位置3具有H、K、R、S或T，在位置4具有F、H、I、L、N、V或Y，和在位置5具有F、H、L、N、Q、T或Y。

8.如权利要求1-4中任一项所述的sPQQGDH，其具有选自系列SEQ ID 1-SEQ ID 18的插入序列。

9.基因，其编码一种如权利要求1-8中任一项所述的蛋白质。

10.载体，其特征在于，其在插入位点的范围内具有一个唯一的限制位点，以便可以在该位点插入编码如权利要求1-6中任一项所述的sPQQGDH的寡核苷酸序列。

11.如权利要求10所述的载体，其具有序列SEQ ID 27。

12.用于生产和鉴别如权利要求1-8中任一项所述的sPQQGDH的方法，其特征在于，在第一步中生产在插入位点的范围内具有唯一的限制位点的载体，在第二步中将多种不同的寡核苷酸序列插入载体中，在第三步中将这样获得的重组载体转化到宿主细菌中并使细菌增殖，在第四步中筛选细菌产生的sPQQGDH，以便测定sPQQGDH对至少两种不同的糖的单独活性以及至少一种糖与至少另一种糖的干扰作用，和在第五步中选择与未修饰的野生菌株的sPQQGDH相比具有改善的底物特异性的那些sPQQGDH。

13.葡萄糖传感器，其包含权利要求1-8的sPQQGDH。