[发明专利]浓度测定

说明书

技术领域

本发明涉及用于确定分析物浓度的测定(assay)，其包括与配体承载传感器表面的结合(binding)的检测，特别地涉及其中用相同的配体承载传感器表面顺序分析多个样本的这样的测定，其中在每个分析循环之间再生传感器表面。

背景技术

可以实时监测分子相互作用的分析传感器系统正获得日益增加的兴趣。这些系统常常基于光学生物传感器并且通常称为相互作用分析传感器或生物特定相互作用分析传感器。代表性的这样的生物传感器系统是由GE Healthcare Biosciences AB(乌普萨拉，瑞典)销售的Biacore仪器，其使用表面等离体振子共振(SPR)用于检测样本中分子和固定在感测表面上的分子结构之间的相互作用。利用该Biacore系统，不仅实时确定样本中特定分子的存在和浓度而且实时确定例如分子相互作用的结合速率和分解速率常数等另外的相互作用参数而不使用标记(labeling)是可能的。

一般，在生物传感器测定中，当分析物或分析物结合配体(取决于测定形式)已经结合到传感器表面上的固定配体时，结合的物种通过用合适的流体处理释放以使表面准备与新样本接触，即称为再生的过程。通常，传感器表面可以经受相当大量的分析循环。然而，许多配体(例如病毒抗原等)常常具有差的稳定性，其使表面的分析物结合能力随循环数而减小，并且可妨碍配体对于定量目的的使用。尽管结合能力的极微减小常常可以通过频繁校准补偿，这显著减小处理能力并且还由于试剂消耗而增加成本。

本发明的目的是提供该问题的解决方案并且提供最小化在表面的结合能力漂移期间频繁校准的需要并且显著提高定量测量的质量的测定方法。

发明内容

上文提到的目的以及其他目的和优势用包括规格化步骤的方法获得，其中每个分析循环使用特定的虚拟校准曲线评价，即每个分析循环获得唯一的校准曲线或特定校准系数。由此，甚至在配体承载传感器表面的情况下(其结合能力显出随已经用传感器表面分析的样本数目的显著漂移)，必需的校准运行的数目可以最小化。

在一个方面，本发明因此提供通过使每个样本顺序经受分析循环来确定至少一个分析物在多个样本中的浓度的方法，该分析循环包括使样本或样本来源的溶液与传感器表面接触，该传感器表面承载能够特定地结合分析物的物种或分析物结合物种。检测与传感器表面的结合的量，并且传感器表面然后再生以使它为下一个分析循环做准备。基于检测的与传感器表面的结合，分析物在每个样本中的浓度使用虚拟校准数据确定，从通过使传感器表面与含已知浓度的分析物的样本接触所获得的真实校准数据来对每个分析循环计算该虚拟校准数据。

真实校准数据通过在分析序列期间的至少两个、优选地三个或更多不同时间(例如在多个样本的序列的开始、中间和最后)执行的校准循环获得。每个校准用至少两个、而优选地五个或更多不同的浓度(循环)执行。

在一个实施例中，虚拟校准数据包括每个循环的特定虚拟校准曲线。这样的特定校准曲线可从对每个循环由真实校准数据预测的虚拟浓度来计算，其优选地通过将真实校准数据或曲线的已知浓度拟合到传感器响应的模型方程(典型地使用循环次数作为x以及使用响应作为y)来进行。

在另一个实施例中，虚拟校准数据包括每个循环的校准系数。这样的校准系数可从真实校准数据计算的校准方程预测。

固定到传感器表面的配体可是分析物特定配体、分析物或分析物类似物、或捕获剂，其进而结合分析物特定配体。可使用各种测定形式，包括直接测定、抑制型测定、竞争型测定和夹心测定。

本发明的更完整理解以及其的另外的特征和优势将通过参考下列详细说明和图获得。

附图说明

图1是在样本中具有不同的病毒浓度的三个情况(a-c)的在传感器表面上抑制型病毒测定的示意图示；

图2是与图1相似的示意图示，其中三个不同的病毒抗原固定到传感器表面上相应分开的点和对于每个抗原特定的三个不同的抗体用于定量化；

图3是示出在传感器表面上具有固定流感病毒抗原的抑制型测定中测量的相对响应/稳定性与不同流感病毒/抗血清混合物的浓度的关系的图。

图4是示出对于多个不同的流感病毒抗血清(influenza virus anti-sera)与具有固定流感病毒抗原的传感器表面的结合的所测量的相对响应与分析循环数的关系的图。