[发明专利]乙酰氨基酚的检测

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2008年4月28日提交的美国临时申请No.61/048,406的优先权，其内容以引用方式并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及一种对样品中存在的对氨基苯酚的浓度进行测定的检测方法。更具体地说，本发明涉及一种对样品中的乙酰氨基酚的浓度进行测定的基于酶的检测方法。

背景技术

药物毒性是导致急性肝功能衰竭的主要原因。在肝衰竭的评价中，临床实验室在诊断中起着至关重要的作用，使得能够及时启动合适的治疗。

乙酰氨基酚(N-乙酰基-对氨基苯酚)一直在处方上作为解热镇痛药。即使没有处方，它也是广泛可得的，并且在许多常见的治疗制剂(如，感冒和流感的治疗药物)中，它是一种活性成分。这种药物的广泛应用使得它在患有肝脏功能障碍的患者中成为受到关注的可疑的肝毒性药物。

虽然以治疗剂量服用乙酰氨基酚很少引起副作用，但有报道这样的病例：慢性、过度地使用乙酰氨基酚导致了肝毒性和肾毒性。急性过量地摄取大量乙酰氨基酚引起了谷胱甘肽储备的耗竭和毒性代谢产物在肝脏中的积累，这可导致严重甚至致命的肝衰竭。

当过量使用乙酰氨基酚时，高活性中间体N-乙酰基对苯并醌亚胺会在肝脏中积累。该中间体与肝脏中的硫醇(尤其是，谷胱甘肽)发生反应。谷胱甘肽被氧化为谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。肝脏中过量的GSSG水平会导致细胞坏死。通常报道的乙酰氨基酚中毒是在血清浓度超过约20mg/dL(1324μmol/L)。

往往谷胱甘肽前体N-乙酰基半胱氨酸(NAC)是作为治疗乙酰氨基酚过量的解毒剂而给药的。给药的大约70％的NAC是在肝脏中代谢。据信，至少由于以下原因，NAC作为解毒剂：它是谷胱甘肽前体，它是强效的抗氧化剂，并且它提高了肝脏中GSSG还原酶的效率。据信，通过补充谷胱甘肽储备并防止GSSG在肝脏中积累，NAC的给药(至少部分上)将由过量使用乙酰氨基酚造成的损害最小化、或避免由过量使用乙酰氨基酚造成的损害。

往往高浓度的NAC是这样给药的：开始以初始负荷剂量的给药水平，随后在整个疗程中维持NAC的水平。该负荷剂量可导致NAC的血清水平在2000mg/L或更高，并且维持水平通常为约800mg/L至1000mg/L。理想的是，在整个NAC疗程中对乙酰氨基酚水平进行监测以保证维持合适的治疗水平保持而避免不必要地或者过度地暴露于NAC。

偶然以及故意的过量使用乙酰氨基酚的发生率明显增加。对于过量使用乙酰氨基酚的诊断和治疗要求体内药物的早期检测和准确测量。必须迅速、准确地测定原位(on board)的乙酰氨基酚的量，以便临床医师能迅速将合适治疗剂量的NAC给药于患者。非常需要快速、可靠而稳定的测定生物样品中的乙酰氨基酚浓度的临床检测方法。

已知的测定生物样品中的乙酰氨基酚浓度的方法包括(例如)各种色谱技术和分光光度法技术。

气相色谱法和高效液相色谱法已被证明是可靠和准确地测定生物样品中的乙酰氨基酚水平的方法，不过两者均为需要昂贵的仪器和高水平的技术人员来操作的冗长方法。这类方法并不特别适合于需要快速结果的Stat实验室。

差式分光光度法已经被广泛的应用，但这个方法需要耗时的溶剂提取，这在临床检测中是不需要的。更快速的分光光度法通常不能提供所需的特异性。

比色技术包括单纯比色法和基于酶的比色检测法。多种基于免疫的检测法也是可适用的，但是它们往往明显更贵，因此是不需要的，在临床环境中尤其是如此。

虽然与基于免疫的检测方法相比，基于酶的检测方法方便和经济，但是基于酶的检测方法通常是更不可靠的，因为它们容易受到经常出现在患者样品中的生物分子(如，胆红素和血红蛋白)的干扰。患者样品中的这种分子水平提高可引起假阳性结果(参见例如Bertholf等，2003)，这可能潜在导致误诊以及治疗的不合适的选择和剂量。

在治疗水平的NAC存在下，已知的酶检测法也受到干扰。因此，在NAC治疗过程中，由于测量的乙酰氨基酚水平不准确，酶检测法通常不能用于监测乙酰氨基酚水平。这是已知的酶促乙酰氨基酚检测法的显著缺点。

已知的酶检测法利用三个主要成分：芳基酰基酰胺酶、显色(或成色剂)化合物和氧化剂，该氧化剂具有足够的氧化潜力以催化偶合反应。