[发明专利]新颖启动子及包含其之病毒载体

说明书

技术领域

本发明系关于一种分离的核酸启动子及包含其的条件复制型腺病毒载体(conditionalreplication adenovirus vector，CRAD)。特定而言，分离的核酸启动子包含剔除p53反应组件(response element)的人类双微粒体基因2(human double minute 2，hdm2)P2启动子。

背景技术

癌症为死亡的重要原因。视癌症类型而定，主要以手术、化学治疗及/或放射治疗处理。此等治疗通常无法成功地以手术去除所有的癌症且可能发生转移；一些癌症对化学治疗及放射治疗具有抗性；及抗化学治疗的肿瘤常会扩散。有需要发展单独使用或结合传统技术的新颖疗法。

一种可能疗法为使用表现抗癌蛋白质的病毒载体治疗肿瘤。腺病毒载体已被证明可用于各种基因治疗应用，基于腺病毒的载体具有适合于癌症及基因疾病治疗的数种特征。腺病毒易于在培养基生长且达到安定的高效价病毒液。它们的宿主范围广泛，可在大部分的人类癌症细胞中复制，且可藉位置突变及插入以外来启动子调控的外来基因而操纵其基因组。

条件复制型腺病毒载体(CRAD)已成为新一类的抗癌剂，其可在肿瘤细胞中选择性复制并溶裂他们(1-3)。美国第7,109,029号专利发现一病毒载体，其具有至少一种干扰基因组件(interfering genetic element)，包含至少一种转录单元，其中至少一个隔绝序列(insulating sequence)位于5’至该转录单元的转录起始位置及3’至该干扰基因组件。美国第7026164号专利提供E1A/E1B缺陷腺病毒(E1A/E1B deficient adenovirus)生长的腺病毒包装细胞株(adenovirus packaging cell lines)，其实质上不含复制型腺病毒(replicationcompetent adenoviruses，RCA)。以CRAD为主的癌症治疗已进行临床试验评估(4-7)。CRAD的安全性及有效性视相对于正常细胞，肿瘤中的特定病毒复制而定。在正常细胞，但不在肿瘤细胞，删除编码病毒生命周期所需蛋白质的基因是诱导肿瘤专一性病毒复制溶裂的策略(3)。此策略已用于剔除E1B-55kD的治疗性CRAD，其在p53-非功能性肿瘤细细胞中运用特定细胞病变效果(8，9)。p53基因是已被充分研究且已知的基因之一。p53在将各种不同刺激(例如，DNA损伤，转录或复制的去调控(deregulation)及致癌基因转化(oncogene transformation))转变成细胞生长抑制或凋亡(cell growth arrest or apoptosis)的细胞压力反应(cellular stress response)中扮演重要角色。P53人类癌细胞中被去活化。当p53被去活化，不正常的肿瘤细胞无法自细胞族群中去除且能够增殖。剔除E1B-55kD的治疗性CRAD的实例为ONYX-015(dl1520)，其在p53非功能性肿瘤中已显示抗肿瘤活性(10，11)。剔除E1B-55kD的腺病毒在具p53^wild的细胞中无法有效复制。在正常细胞中由剔除E1B-55kD的腺病毒诱导的p53表达使得此等细胞对剔除E1B-55kD的腺病毒的溶裂复制具有抗性。相反地，缺乏p53使肿瘤细胞对剔除E1B-55kD的腺病毒的溶裂复制不具抗性。