[发明专利]微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法

权利要求书

1.一种微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所用的微生物为热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-m，该菌种已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：CCTCC NO：M209222。

2.如权利要求1所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于以热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-m为发酵种子，在以正烷烃为发酵基质的培养基混合液中同步发酵，生产混合长链α，ω-二元酸。

3.如权利要求2所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的发酵种子是由热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-m菌株经斜面培养、烷烃种子培养基培养，获得一级种子罐的种子；所使用的固体斜面培养基为10个巴林糖度的麦芽汁加2％琼脂制成；液体培养基为10个巴林的麦芽汁；烷烃种子培养基包括：KH₂PO₄6-12g/L，酵母膏3-8g/L，玉米浆3-8g/L，蔗糖10-30g/L，重蜡10-30g/L，尿素1-3g/L，自来水配制，自然PH。

4.如权利要求2所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的正烷烃发酵基质为200^#轻蜡油。

5.如权利要求2或4所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的同步发酵过程如下：

发酵培养基的主要组分为：碱金属磷酸盐4-15g/L、氯化钠0.5-2.5g/L、硝酸盐1-10g/L、醋酸盐2-6g/L、消泡剂400-1200ppm、重蜡或蔗糖15-30g/L、青霉素100-200单位/mL，其中碱金属磷酸盐可从KH₂PO₄或NaH₂PO₄中选一种，硝酸盐可从钾或钠盐中选一种；

具体发酵方法为：把培养好的经过镜检，没有杂菌的菌种液，按发酵培养基的15-25％(V/V)的用量，接入PH 5.5-9.0的，含有15-30％(V/V)的200^#轻蜡油和85-70％(V/V)发酵培养基的混合液中；将上述混合物在25-34℃通气发酵72-170小时；第一阶段，体系PH控制在5.5-7.0，以菌体生长为主，同时生产一定数量的二元酸；第二阶段，体系PH控制在7.0-8.0之间，以发酵产酸为主，也生长部分菌体；第三阶段，只产酸，不长菌体；从72小时开始，每天补加正烷烃，使发酵液中正烷烃浓度始终＞5％(V/V)。

6.如权利要求2或4所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的同步发酵过程如下：

发酵培养基的组成为：碱金属磷酸盐6-10g/L、氯化钠1.0-2.0g/L、硝酸盐2-8g/L、醋酸盐3-5g/L、消泡剂400-1200ppm、重蜡或蔗糖15-30g/L、青霉素120-180单位/mL，其中碱金属磷酸盐可从KH₂PO₄或NaH₂PO₄中选一种，硝酸盐可从钾或钠盐中选一种；

具体发酵方法为：把培养好的经过镜检，没有杂菌的菌种液，按发酵培养基的15-25％(V/V)的用量，接入PH 6.0-6.8的含有15-30％(V/V)的200^#轻蜡油和85-70％(V/V)发酵培养基的混合液中；将上述混合物在27-31℃通气发酵72-170小时；第一阶段，体系PH控制在5.5-7.0，以菌体生长为主，同时生产一定数量的二元酸；第二阶段，体系PH控制在7.0-8.0之间，以发酵产酸为主，也生长部分菌体；第三阶段，只产酸，不长菌体；从72小时开始，每天补加正烷烃，使发酵液中正烷烃浓度始终＞5％(V/V)。

7.如权利要求2所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的同步发酵结束后，进行破乳分层，上层残油回收再用，放出中间清液，下层菌体层经膜分离压滤；合并清液，加入适量活性炭，在85-90℃脱色30分钟，除去活性炭后，脱色液加热至70-80℃，加HCL或H₂SO₄至PH 3进行酸化结晶，冷却至30℃后，压滤，空气吹干，烘干机烘干，得白色二元酸。

8.如权利要求2所述微生物同步发酵正烷烃生产混合长链二元酸的方法，其特征在于所说的发酵基质用C₁₁-C₁₈的单一正烷烃和/或混合正烷烃，生产相应的单一二元酸和/或混合二元酸。