[发明专利]肺炎型支原体药敏快速检测试剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂及制备方法，特别涉及因支原体引起的呼吸道及肺部疾病检测的药敏检测试剂及制备方法。

背景技术

肺炎型支原体是呼吸道和肺部感染性疾病的常见病原体，检出率占呼吸道感染人群的20％～40％。肺炎支原体感染可引起上呼吸道感染及支原体肺炎，其用药方法与病毒性、细菌性感染均不同，不同个体感染的肺炎支原体对药物的敏感性也不同，肺炎支原体诊断加药敏的检测试剂，能保证肺炎支原体病早期诊断及科学用药，使患者得到及时有效治疗。目前国内外对支原体实验诊断技术较多，如特异性抗体检测技术、代谢抑制试验、Southern Blot、PCR法等。抗体检测技术易出现交叉反应。代谢抑制试验，需加特异性抗体抑制支原体生长，技术较复杂，临床应用不多。Southern Blot实验技术要求高，不易普遍开展，PCR法容易出现假阳性和假阴性，已被国家卫生部下令禁止用于临床检验。而培养法是根据支原体的生活特性而采用的特异培养基检测支原体的方法。该方法不仅能特异性地诊断支原体感染，还能和药敏板结合，对所感染的支原体进行药敏分析。目前各医院使用的支原体培养基有单一的解脲支原体培养基，单一的人型支原体培养基，和联合型支原体培养基。而且单一支原体培养基已有人申报了中国专利(申请号：9611701.0)。联合型支原体培养基也有中国专利(申请号：00113758.1)。以上支原体培养基均应用于尿道生殖道的支原体感染的诊断，而用于呼吸道和肺部支原体感染的肺炎支原体检测试剂已有商品问世，但未见专利文献报道。肺炎型支原体药敏检测试剂至今未见相关商品及专利文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂及制备方法，该试剂能特异性地检出肺炎支原体的同时检测所感染的肺炎支原体对哪种常用药敏感，主要用于小儿科和呼吸科的呼吸道和肺部支原体感染的诊断及指导临床用药治疗，为肺炎支原体感染性疾病的及早诊断及有效治疗提供保证。

为达到以上目的，本发明是采取如下技术方案予以实现的：

一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，其特征在于，所述肺炎支原体培养基按质量百分比包括下述组分：

基础培养基70～90％；

小牛血清10～30％；

酵母粉0.5～2.5％；

葡萄糖0.1～0.5％；

上述肺炎支原体培养基中还包括外加0.08～0.2ppm的酚红、10～20万单位/100ml的青霉素；

其中基础培养基按质量百分比包括下述组分：

母液      96～99％

氯化钠    0.3～0.7％

磷酸二氢钾0.1～0.3％

蛋白胨    0.3～3％

其中母液为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比4∶6～6∶4的混合溶液；

所述药敏板是一块24孔培养板，标有1～12号，每号标有A、B两孔，其中1～11号孔分别包被有11种常规治疗支原体药物，这些药物从以下7大类药物中筛选出：β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类；每个号的A、B两孔分别包被同一种药的低、高两种不同浓度的药液，高浓度药液均为一次成人药量溶解到1～5ml缓冲液中，低浓度药液为高浓度药液再稀释15～25倍，第12孔不包被药物，留作对照。

一种上述肺炎型支原体药敏快速检测试剂的制备方法，包括下述步骤：

一、肺炎支原体培养基的制备

(1)分别提取新鲜牛肉浸出液、猪胃或肺消化液，按质量比4∶6～6∶4的比例，将牛肉浸出液与猪胃或肺消化液的混合制得培养基母液；

(2)将以上培养基母液与下列物质按质量百分比搅拌混合：

母液            96～99％

氯化钠          0.3～0.7％

磷酸二氢钾      0.1～0.3％

蛋白胨          0.3～3％

待氯化钠、磷酸二氢钾和蛋白胨完全溶解后，煮沸过滤，取滤液，即制得基础培养液；

(3)将基础培养基与下列物质按质量百分比搅拌混合均匀，

基础培养基       70～90％

小牛血清         10～30％

酵母粉           0.5～2.5％

葡萄糖           0.1～0.5％

外加：酚红0.08～0.2pp m，青霉素10～20万单位/100ml，调节pH值为6.0～8.0，即制得肺炎支原体培养基。

二、药敏板的制备