[发明专利]用于同时检测伤寒、副伤寒的生物芯片及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物芯片技术领域，尤其是涉及一种用于同时检测伤寒、副伤寒的生物芯片及其制备方法，以及包括所述芯片的检测试剂盒。

背景技术

肠道感染是世界排名第3位的疾病病因，其中伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌引起的肠热症占主要部分。这种疾病构成在卫生条件差和饮水未经处理的国家更为明显，是威胁人们健康的主要问题。在亚洲，甲型副伤寒沙门菌已经成为肠热症的主要病因。中国自1998年分离到甲型副伤寒沙门菌，它逐渐成为流行的优势菌型，经常引起地方性流行和暴发。

伤寒副伤寒在全球分布广泛，2000年世界卫生组织(WHO)估计全球伤寒总发病数为2 165万，发病率高达355/10万，死亡数21.6万，其中副伤寒发病数541万。虽然全球的伤寒副伤寒总发病呈下降趋势，但在卫生状况不良的地区，发病率仍居高不下，常出现水和食物污染引起的暴发和流行。伤寒副伤寒沙门菌耐药日益严重，流行菌型不断变迁，伤寒副伤寒高发病率所造成的疾病负担仍不容忽视。

目前伤寒副伤寒的诊断方法有：细菌的分离培养、血清学方法如肥达氏反应、乳胶凝集试验、ELISA、核酸检测(PCR)。分离培养法是在患者的体液标本中培养出伤寒沙门菌，是最基本也是诊断伤寒病例的金标准。培养所用的标本可有骨髓、血液、粪便和尿液，Gilman等的实验中证明即使在使用抗生素的前提下，骨髓的培养阳性率仍然最高，可达到90％，而血、尿等标本的培养阳性率受到显著影响。但抽取骨髓对患者来说很痛苦，并且增加了伤寒病诊治过程中的风险。由于培养的方法受到抗生素应用的影响，阳性率大大降低，而且培养的方法至少经过3～5天才能得到结果，不能及时为正确合理的治疗方案提供依据。

血清学方法所针对的目的抗原(或其相应的抗体)有以下3种：菌体抗原O、鞭毛抗原H和Vi抗原。其中，肥达反应存在诸多问题，在诊断上含糊不清，不敏感不特异，已表现出显著的局限性，需要改用其他敏感特异的检测方法。相对于肥达反应18～24h的时耗，ELISA显示了快速灵敏和特异的特点人们普遍认为EL ISA方法是一种既灵敏又特异的诊断方法。尤其是EL ISA方法同时检测IgM和IgG比单独检测IgM结果更可靠。

PCR检测标本中的伤寒沙门菌核酸，是目前公认最为敏感和特异的诊断方法。但PCR方法并不是完美的，不仅容易污染，另外，伤寒和甲型副伤寒沙门菌是胞内寄生菌，抗生素的滥用加剧了血液中细菌数量的减少，制备DNA模板过程中样品的损失增加PCR扩增的难度。但PCR方法的灵敏度比血培养和肥达氏反应显著高，并且其高灵敏度和特异性对临床有争议的伤寒病例做出快速、确切的诊断有巨大作用。

上述方法都各有优缺点，但都需要一次实验只能检测一种细菌，或者一个抗体，不能同时检测出伤寒O、H、VI和副伤寒甲、乙、丙型。在检测效率方面费时费力，尤其传统的肥达氏反应更需要12-24小时，分离培养需要3-5天时间。PCR方法固然敏感和特异，但也要几个小时，也需要昂贵仪器，一次实验只能作出一种细菌的诊断，在基层医疗机构无法实施，因为它需要有严格控制的操作空间和结净环境。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种用于同时检测伤寒、副伤寒的生物芯片，解决现有技术存在的缺陷。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于同时检测伤寒、副伤寒的生物芯片包括芯片片基，所述的片基设置有至少一个检测单元，所述的检测单元设置有检测样待检点阵，所述的检测点阵为双位点设计；所述的检测点阵包括质控检测点，阴性对照检测点，伤寒O、H、VI型检测位点和副伤寒甲、乙、丙型检测位点；所述的质控检测点，阴性对照检测点，伤寒O、H、VI型检测位点和副伤寒甲、乙、丙型检测位点分别包被有相应的抗原。

优选的方案是：所述的检测点阵还包括空白对照检测点。

更为优选的方案是：所述的检测单元的检测样待检点阵为4×5双位点设计；所述的质控检测点，阴性对照检测点，伤寒O、H、VI型检测位点和副伤寒甲、乙、丙型检测位点以及空白对照检测点设置有两个重复；所述的阴性对照检测点以及空白对照检测点为伤寒O、H、VI型检测位点和副伤寒甲、乙、丙型检测位点的共同对照检测点。

更为优选的方案是：所述的质控检测点包被的抗原为为用于检测IgM和/或IgG型抗体的抗原。

更为优选的方案是：所述的芯片片基为活化处理后的玻璃片基，或者为膜片基，或者为高分子硅片基，或者为塑料片基。